hutu80细胞（人十二脂肠腺癌细胞）

HuTu 80细胞（又称 HuTu-80、HuTu80 或 HUTU-80）是一株人源十二指肠腺癌细胞系，来源于一名53岁男性患者的十二指肠原发肿瘤组织，具有典型的上皮样细胞形态，以贴壁方式生长，并具有裸鼠体内成瘤能力。HuTu-80细胞系的标准化信息为 ATCC HTB-40，Cellosaurus 编号为 CVCL_1301，RRID 为 RRID:CVCL_1301。除常规用于十二指肠腺癌发生机制、肿瘤细胞生物学及抗肿瘤药物筛选研究外，HuTu 80细胞还具有一定的肠内分泌细胞功能，涉及肠道 L 细胞相关生物学特征，可作为研究肠内分泌分化、营养物质刺激后的激素反应以及胃肠道相关功能模型的实验材料。HuTu 80细胞表面存在较丰富的蛙皮素受体（Bombesin receptor），相关受体结合位点数量约为6000个，这一特征也为受体介导的信号转导及相关药理学研究提供研究基础。

HuTu 80细胞最初收录于美国海军生物科学实验室（Naval Biosciences Laboratory，NBL）的细胞资源体系，收藏于1982年转移至美国典型培养物保藏中心（ATCC），ATCC 历史记录中的提交者为 V. Larson，并将其归入 Human Tumor Cell Bank。

hutu80细胞特性特征

• 来源及形态：人十二指肠腺癌来源，上皮样形态、贴壁生长。

• 基因变异：携带 CTNNB1 c.110C>T（p.Ser37Phe，简称 S37F）杂合突变；该基因编码 β-catenin。

• 微卫星状态：微卫星稳定型（MSS）。

• SCT 表达：表达促胰液素基因 SCT，是研究其转录调控的细胞模型。

• 激素相关转录本：研究通过 RT-PCR 及测序检出 GCG（胰高血糖素原）、PYY 和 GIP 相关转录本；

• 内分泌转录因子：检出 NEUROD1 表达；NeuroD/E2A 参与 SCT 启动子调控。

• SCT 转录调控：Sp1、Sp3 参与 SCT 启动子调控，二者比例影响其转录活性。

• SCT 启动子甲基化：一项研究检测的 26 个启动子相关 CpG 位点均为非甲基化状态；该结果仅针对所测区域。

• GRP 受体：天然表达具有功能的胃泌素释放肽受体 GRPR（BB2），具有高亲和力蛙皮素结合能力。

• 受体信号：蛙皮素可刺激肌醇磷酸生成；同一研究中未观察到其促进细胞增殖或软琼脂克隆形成。

• 化学感知相关表达：检出 GNAT3/Gαgustducin、TAS1R3 及部分 TAS2R 苦味受体转录本；Gαgustducin 另有免疫染色证据。

• 钙信号反应：苦味物质 phenylthiocarbamide 刺激可引起细胞内 Ca²⁺ 升高。

• SHP 调控：SHP（NR0B2）可抑制 SCT 启动子活性及内源 SCT 表达，参与胆汁酸相关的转录调控。

• 核型特征：假二倍体，染色体众数为 46，存在结构异常及标记染色体。

• 成瘤特性：可在裸鼠中形成分化良好的乳头状腺癌；该描述属于移植瘤表现，不代表原患者的临床分期。

hutu80细胞（人十二脂肠腺癌细胞）参数表

hutu80细胞（人十二脂肠腺癌细胞）培养教程

HuTu-80细胞复苏

• 从液氮气相中取出 HuTu 80细胞冻存管，迅速放入37℃水浴中轻轻晃动，使细胞快速融化，通常约需2分钟。待冻存液基本融化后立即取出，避免长时间水浴。使用70%乙醇消毒冻存管外壁，随后在无菌操作环境中打开冻存管。

• 细胞接种

• 根据细胞状态及实验要求，可以选择以下两种复苏方式：

• 直接接种法： 将解冻后的 HuTu-80细胞悬液直接加入预先准备好的完全培养基中，充分稀释冻存保护剂后接种至培养瓶。

• 离心接种法： 将细胞悬液以约125 ×g离心5–10分钟，弃去上清液，使用新鲜完全培养基轻柔重悬细胞，再接种至培养瓶，以去除冻存液中的 DMSO。

• 复苏后培养

• 将接种后的 HuTu 80细胞放入37℃、5% CO₂培养箱中继续培养，定期观察细胞贴壁、形态及恢复情况。ATCC 建议每周更换培养基2–3次。首次换液时间可根据是否经过离心处理、细胞贴壁状态及冻存液残留情况进行调整。

HuTu 80细胞传代

• HuTu 80细胞属于贴壁生长的人源肿瘤细胞，常规传代采用胰酶-EDTA消化法。传代过程中应注意控制消化时间，避免细胞受到过度酶解而影响后续贴壁及增殖能力。

• 去除旧培养基

• 在倒置显微镜下观察 HuTu-80细胞生长状态，确认适合传代后，吸除培养瓶内的旧培养基。使用少量胰酶-EDTA溶液短暂润洗细胞层，以减少残留血清对胰酶活性的影响，润洗后弃去液体。

• 胰酶消化

• 向 T75 培养瓶中加入约2–3 mL 0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA，使消化液充分覆盖细胞层。观察细胞脱落情况，通常需要5–15分钟。必要时可放置于37℃环境中促进细胞分散。

• 消化过程中应避免拍打、撞击或剧烈摇晃培养瓶，以免造成细胞结团。应以细胞实际脱落情况作为消化终点，避免过度消化。

• 终止消化及细胞重悬

• 待 HuTu 80细胞充分脱落后，加入约6–8 mL EMEM＋10% FBS 完全培养基终止消化，并通过轻柔吹打使细胞形成较均匀的悬液。

• 传代流程未要求常规传代时必须离心去除胰酶，可直接进行后续分瓶操作。

• 分瓶培养

• 按照1:2–1:5的比例进行细胞传代，将细胞悬液分配至新的培养器皿中，并补充适量完全培养基。轻轻混匀后放入37℃、5% CO₂培养箱继续培养。

• HuTu-80细胞的传代比例应结合实际生长速度、细胞密度及实验需求进行调整。ATCC 未对该细胞规定固定的传代周期或统一汇合度阈值，因此不建议仅依据培养天数决定传代时间。

HuTu 80细胞冻存

• 细胞收集

• 按照常规传代方法消化 HuTu 80细胞，加入完全培养基终止消化，轻柔吹打制备细胞悬液。取部分细胞进行计数及活率检测，其余细胞悬液以约125 ×g离心10分钟，弃去上清液，收集细胞沉淀。

• 细胞重悬与分装

• 使用预先配制的冻存液轻柔重悬细胞。细胞冻存密度可设置为 \(1\times10^6\)–\(5\times10^6\) 个活细胞/mL。该范围属于通用参考值，并非 HuTu 80细胞专属验证的最佳冻存密度。

• 将细胞悬液分装至无菌冻存管中，每管通常加入1–1.8 mL，并标记细胞名称、冻存日期、传代次数及细胞数量。

• 细胞与冻存液混合后在室温平衡至少15分钟，但不超过40分钟，随后进行程序降温。

• 程序降温及长期保存

• 采用约−1℃/分钟的缓慢降温方式进行细胞冻存。可使用程序降温设备，也可采用适合控速降温的商业冻存容器。

• 使用被动降温装置时，可将冻存管放入预冷至4℃的冻存容器，再转入−70℃或更低温度的冰箱中至少24小时。

• 完成降温后，应及时将冻存管转移至液氮气相中长期保存，储存温度要求低于−130℃。−80℃冰箱主要用于冻存初期的降温过渡，不建议作为 HuTu-80细胞的长期保存环境。

• 冻存效果验证

• 冻存完成后，建议保留原始培养物，待冻存管在低于−130℃环境中保存至少24小时后，抽取一管进行复苏验证。通过观察细胞复苏后的存活率、贴壁能力、形态及增殖情况，评估该批次冻存效果，同时检查细胞无菌状态。