F81细胞（猫肾细胞）

F81细胞（猫肾细胞系）源自健康猫的肾脏组织，是通过原代细胞的传代培养和克隆筛选建立。F81细胞是Clone 81的亚系，而Clone 81则来自CCC3a subline 8C，后者源自CRFK细胞系，具备良好的遗传背景和生长稳定性。

F81细胞表现为上皮样贴壁生长，能够在体外连续传代，且对多种病毒如犬细小病毒、猫泛白细胞减少症病毒和猫杯状病毒等具有较高敏感性。且猫内源性逆转录病毒（RD114）的分泌水平较低。F81细胞被广泛应用于疫苗研发和病毒学研究中，用于评估疫苗效力和抗病毒药物的筛选。

F81细胞特性特征

• 染色体特征：F81细胞为亚二倍体细胞系，染色体众数为30，结构相对稳定，各代次间的染色体畸变率较低。

• F81细胞对多种宠物病病毒表现出敏感性，包括：猫白血病病毒（FeLV）、犬细小病毒（CPV）、猫泛白细胞减少症病毒（FPLV）、猫杯状病毒（FCV）、猫传染性鼻气管炎病毒（FIRV）、水貂病毒性肠炎病毒（MEV）

• 疫苗研发：由于其对多种病毒的高敏感性，F81细胞广泛应用于宠物疫苗的研发和生产。
  

• 检测方法：在F81细胞中可以进行犬细小病毒的原位PCR检测，显示出其在病毒检测中的应用潜力

F81猫肾细胞参数表

F81猫肾细胞培养教程

F81细胞复苏

• 配制完全培养基（RPMI-1640，添加10% 胎牛血清（FBS）和1% 青霉素/链霉素），以确保F81细胞的最佳生长状态。
  

• 从液氮罐中取出F81细胞冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻，轻轻摇动，以加速F81细胞解冻过程，确保不超过1-2分钟。

• 解冻后，将F81细胞悬液迅速转移至含4-6 mL完全培养基的15 mL离心管中，轻轻混匀。
  

• 以1000 RPM离心3-5分钟，弃去上清液，保留F81细胞沉淀。

• 使用新鲜完全培养基重悬F81细胞，将细胞转移至T25或T75培养瓶中，加入6-8 mL完全培养基。
  

• 将培养瓶置于37℃、5% CO₂培养箱中培养，次日观察F81细胞的贴壁情况。

F81细胞传代

• 当F81细胞密度达到80%-90%时，适时进行传代培养。
  

• 弃去旧培养基，用无钙镁的PBS缓冲液洗涤F81细胞1-2次，去除残留培养基和代谢产物。
  

• 加入0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA溶液（T25瓶1-2 mL，T75瓶2-3 mL），在37℃下消化1-2分钟，期间观察F81细胞形态。
  

• 当大部分F81细胞变圆且开始脱落时，立即加入含10% FBS的培养基中和胰蛋白酶。

• 将F81细胞悬液以1000 RPM离心3-5分钟，弃去上清液。
  

• 轻轻吹打重悬F81细胞，按1:2至1:5的比例分至新培养瓶中，补加6-8 mL完全培养基。

F81细胞冻存

• 配制F81细胞冻存液：55%基础培养基（RPMI-1640），40% FBS，5% 二甲基亚砜（DMSO）。
  

• 在传代后收集F81细胞，离心去除上清液。
  

• 使用冻存液重悬F81细胞，分装至冻存管，每管1 mL细胞悬液。
  

• 将F81细胞冻存管置于预冷的冷冻盒中，以每小时降温1℃的速度降至-80℃，随后转移至液氮罐中长期保存。
  

注意事项

• 无菌操作：操作全程在生物安全柜中进行，确保F81细胞无菌，避免污染。

• 细胞状态检查：定期观察F81细胞形态，确保其贴壁性和健康状态良好。

• 避免过度传代：过度传代可能影响F81细胞的生长特性和病毒敏感性，建议控制传代次数。