MDBK细胞（NBL-1牛肾细胞）

MDBK细胞系由S.H.Madin和N.B.Darby于1957年2月18日从一头明显正常的成年公牛的肾脏中提取。

MDBK牛肾细胞于1967年7月以冷冻安瓿（F-145）的形式从ATCC第96代获得，并以冷冻安瓿（F-145）的形式储存在ATCC。1973年，发现这批细胞受到牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的污染，导致其在某些用途上受到限制。为解决这个问题，1982年8月，RA Van Deusen向ATCC提交一株经过筛选生产且未感染BVDV的MDBK细胞，该批次为第110代，另外成为生产CCL-22细胞系的基础。

MDBK (NBL-1)细胞系的染色体为亚二倍体（2n=60），亚二倍体细胞中期通常有11-14条标记染色体，其中包括4-5条着丝粒、3-4条亚中着丝粒和4-5个顶端着丝粒。未见HSR染色体和DM染色体。

MDBK细胞特性特征

• MDBK细胞对多种病毒表现出易感性，包括：水疱性口炎病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛细小病毒、牛腺病毒2和3、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、副流感3型病毒

• 基因表达：MDBK细胞表达角蛋白。

• 病毒学研究：MDBK细胞适合作为转染宿主，用于携带口蹄疫病毒（FMDV）前导蛋白基因逆转录病毒载体的构建及其在牛肾细胞中的表达研究。

• 药物筛选与基因工程：MDBK细胞用于新药研发、毒性测试及基因整合和表达研究

MDBK牛肾细胞参数表

MDBK细胞（NBL-1牛肾细胞）培养教程

MDBK细胞传代步骤

• 在进行传代前，需在生物安全柜中确保无菌操作，准备好PBS（磷酸盐缓冲液）和0.25%胰酶-0.53mM EDTA。
  

• 吸除MDBK细胞的旧培养基，加入3-5 mL PBS轻轻洗涤，以去除残留血清和代谢产物。
  

• 吸干PBS后，加入1 mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，均匀覆盖MDBK细胞表面，置于37°C培养箱中消化，时间约为20秒到10分钟，直至细胞间隙增大。
  

• 加入6-8 mL含10% FBS的完全培养基终止胰酶消化，并轻轻吹打混匀MDBK细胞悬液。
  

• 在1000 rpm（约150 g）下离心3分钟，弃去上清液。用新鲜完全培养基重悬MDBK细胞，调整至合适浓度。
  

• 将重悬的MDBK细胞按1:3至1:4的比例接种到新的培养瓶中，根据细胞密度和生长情况调整传代比例。
  

MDBK细胞冻存步骤

• 使用92%完全培养基和8% DMSO作为冻存液，以减少冰晶对MDBK细胞的损伤。
  

• 将MDBK细胞冻存管置于4°C冰箱中预冷10分钟，然后转移至-20°C冷冻2小时，接着放入-80°C过夜。最后，长期储存于液氮罐中。
  

MDBK细胞复苏步骤

• 从液氮中取出冻存的MDBK细胞，立即放入37°C水浴中快速解冻，时间控制在1-2分钟，以避免DMSO的毒性作用。
  

• 解冻后，迅速加入5 mL预温的完全培养基稀释DMSO。轻轻混匀后，将细胞转移至离心管中，在1000 rpm下离心3分钟，弃去上清液。
  

• 用新鲜的完全培养基重悬MDBK细胞，并接种到培养瓶中，置于37°C、5% CO₂培养箱中孵育，观察细胞贴壁情况和生长状态。
  

注意事项

• 无菌操作：在操作MDBK细胞过程中，确保在无菌条件下进行，使用生物安全柜以防止细胞污染。

• 定期监测：应定期观察MDBK细胞的形态和生长状态，及时调整培养基的pH和气体浓度。

• 复苏后检测：复苏后的MDBK细胞应尽快进行活力检测，确保其状态和功能的稳定性。

• 传代频率：建议每2-3天传代一次，避免MDBK细胞过度融合影响实验效果。