Mv.1.Lu细胞（Mv1Lu细胞、NBL-7貂肺上皮细胞）

Mv1Lu（NBL-7）细胞系是从阿留申水貂（Mustela vison）的肺组织中获得，来源于未交配、接近足月的胎儿。1964年5月，A.J. Kniazeff、W.A. Nelson-Rees 和 N.B. Darby Jr. 等人利用胰蛋白酶对阿留申水貂的几个接近足月的未交配胎儿的胰蛋白酶化肺组织进行消化处理，从中成功分离出该细胞系。Mv.1.Lu细胞被广泛应用于小鼠和猫肉瘤病毒的焦点形成检测实验，是一种理想的转染宿主细胞。

Mv1Lu细胞特性特征

• 倍体特征：存在雄性和雌性二倍体细胞及假二倍体细胞，约58%的细胞染色体数目在二倍体的±1范围内，部分细胞群体中可观察到具有双着丝粒染色体的细胞类型。

• Mv1Lu细胞对多种病毒具有易感性，包括：单纯疱疹病毒、呼肠孤病毒3、痘苗病毒、水疱性口炎新泽西病毒、

• 表面标记：Mv1Lu细胞系在流式细胞术分析中显示出对某些表面标记的表达，这些标记有助于其在转染实验中的应用。
  

• 转染宿主：Mv1Lu细胞被广泛用作转染宿主，适合进行基因表达研究和病毒感染模型的构建。

• 基因组信息：Mv1Lu细胞系的基因组已被部分测序，相关数据可在GenBank等数据库中找到，包括与水貂相关的mRNA序列
  

Mv1Lu貂肺上皮细胞参数表

Mv1Lu细胞、NBL-7貂肺上皮细胞培养教程

Mv1Lu细胞的复苏

• 将Mv1Lu细胞冻存管从液氮中取出，立即放入37℃水浴中，轻轻摇晃，持续1-2分钟，直至细胞悬液完全融化。

• 将解冻后的Mv1Lu细胞悬液转移至离心管，加入4-5 mL预温的MEM培养基，并轻轻混匀。

• 在1000 rpm下离心4分钟，去除上清液以减少DMSO的残留。

• 加入1-2 mL新鲜培养基重新悬浮Mv1Lu细胞，轻轻吹打使细胞均匀分散。将细胞悬液转移至预先准备好的培养瓶中，加入10 mL完全培养基。

• 将培养瓶置于37℃、5% CO₂的培养箱中，过夜培养，以便Mv1Lu细胞充分贴壁。

Mv1Lu细胞的传代

• 当Mv1Lu细胞密度达到80%-90%时进行传代。理想的传代比例为1:2至1:4。

• 弃去旧的培养基，用预温的PBS缓冲液清洗Mv1Lu细胞1-2次，以去除残留的血清。

• 加入1-2 mL胰蛋白酶溶液，均匀覆盖Mv1Lu细胞表面，将培养瓶置于37℃培养箱中观察2-3分钟。

• 当Mv1Lu细胞开始变圆并轻微脱落时，立即加入3 mL含血清的培养基终止消化反应。

• 轻轻吹打Mv1Lu细胞，使其形成均匀的单细胞悬液。

• 在1200 rpm下离心3分钟，弃去上清液。

• 加入适量的新鲜培养基重悬Mv1Lu细胞。

• 将重悬的Mv1Lu细胞均匀分配至新的培养瓶中，添加适量的MEM完全培养基，并确保培养瓶盖微松或使用透气瓶盖，以利于气体交换。

Mv1Lu细胞的冻存

• 在无菌条件下，将90%完全培养基与10% DMSO混合均匀备用。

• 在Mv1Lu细胞状态良好的情况下进行收集，按常规传代步骤处理细胞。

• 用PBS洗涤后，加入胰蛋白酶消化，终止消化后收集Mv1Lu细胞。

• 在1200 rpm下离心3分钟，弃去上清液。将Mv1Lu细胞重悬于冻存液中，细胞密度为每管1 x 10^6个细胞。

• 将Mv1Lu细胞悬液分装至冻存管，每管1 mL。

• 使用程序降温盒，放置于-80℃冰箱中，逐步降温至少4小时，最好过夜降温，以保护Mv1Lu细胞免受冷冻损伤。

• 将冻存管从程序降温盒中取出，转移至液氮罐中进行长期保存。

注意事项

• 消化时间：胰蛋白酶处理过程中，需密切观察Mv1Lu细胞的消化状态，避免过度消化导致细胞损伤。

• 避免污染：所有培养操作应在生物安全柜内进行，使用无菌试剂和耗材，定期检测Mv1Lu细胞的支原体污染。

• 细胞状态检查：传代或冻存前应确认Mv1Lu细胞状态，确保细胞形态正常、无污染、贴壁良好。