小鼠晶状体上皮细胞（原代细胞）

小鼠晶状体上皮细胞（Mouse Lens Epithelial Cells, LECs）是从小鼠的晶状体组织中分离获得，培养过程因无神经、血管组织及其他类型细胞的干扰，具有较高的细胞纯度和单一性。晶状体上皮细胞是覆盖在晶状体囊膜内表面的一层扁平单层上皮细胞，其主要功能是维持晶状体的生理平衡，包括液体与电解质的调控。小鼠晶状体上皮细胞在发育过程中会分化为晶状体纤维细胞，生成晶状体蛋白并逐步失去细胞核及其他细胞器，从而形成晶状体的主要功能结构。研究发现，这一分化过程受眼部液体中的生长因子（如表皮生长因子和胰岛素等）调控，其异常增殖与白内障和后囊混浊等病变密切相关。

在体外培养环境中，晶状体上皮细胞以单层生长，细胞形态呈扁平不规则的多边形，能够连成膜状。体外培养体系为研究晶状体上皮细胞的增殖、分化及其与白内障等疾病提供了重要研究手段。

小鼠晶状体上皮细胞的来源包括多种小鼠品系，如C57BL/6、BALB/c、ICR及昆明小鼠。晶状体组织通常取自正常实验小鼠的眼球前部，其通过悬韧带连接于睫状体。晶状体上皮细胞在调节晶状体代谢及功能方面至关重要，同时也在维持晶状体的透明性和光学特性中扮演核心角色。

小鼠晶状体上皮细胞特性特征

• 高度分化：小鼠晶状体上皮细胞在发育过程中经历多次有丝分裂和分化，最终形成成熟的晶状体细胞，具有特定的形态和功能。

• 透明度：小鼠晶状体上皮细胞的透明性使得晶状体能够有效透过光线，保持眼睛的透明度，确保视觉清晰。

• 代谢活跃：小鼠晶状体上皮细胞的代谢活性较高，能够合成和分解蛋白质、脂肪和糖类，以维持晶状体的正常功能。

• 生长因子的调控：晶状体上皮细胞的分化和极化受到眼部液体中生长因子的调控，例如表皮生长因子（EGF）和胰岛素，这些因子促进了细胞的增殖和功能维持。

• 标记物表达：通过免疫荧光染色，晶状体上皮细胞通常表现出CK18等上皮标记物的阳性反应，这有助于其鉴定。

• 基因表达特征：在发育过程中，小鼠晶状体上皮细胞会表达与细胞周期相关的基因，如Cyclin D1、PCNA等，这些基因在不同发育阶段的表达模式各异。

• 衰老相关标志物：在自然衰老的小鼠中，晶状体上皮细胞中P21和P53等衰老相关蛋白的表达增加，这与白内障等眼部疾病的发展密切相关。

• 细胞周期调控：研究表明，晶状体上皮细胞在不同发育阶段对增殖和凋亡有严格的调控机制，这对于维持晶状体的正常结构和功能至关重要。

小鼠晶状体上皮细胞参数表

原代小鼠晶状体上皮细胞培养教程

细胞复苏

• 从液氮罐或-80℃冰箱中取出小鼠晶状体上皮细胞冻存管，确保操作在无菌条件下进行。
  

• 准备好预热的培养基（如DMEM/F-12）和离心管。

• 将冻存管置于37℃水浴中快速解冻，通常需1-2分钟，期间轻轻摇晃。
  

• 解冻后，立即将1 mL细胞悬液加入到4 mL预热培养基中，混匀。

• 转移混匀的细胞悬液至离心管，以1000 rpm离心3-4分钟。
  

• 弃去上清液，加入1-2 mL新鲜培养基，轻轻吹匀细胞。

• 将悬浮的小鼠晶状体上皮细胞转移至培养瓶（如T25瓶）或培养皿中，添加8 mL预热培养基。
  

• 置于37℃、5% CO₂培养箱中过夜培养。

• 第二天更换培养基，去除解冻过程中可能产生的代谢废物，同时观察小鼠晶状体上皮细胞的生长状态。

细胞传代

• 当小鼠晶状体上皮细胞的生长密度达到80%-90%时，可进行传代。
  

• 弃去培养上清后，用无钙镁的PBS清洗细胞1-2次。

• 加入1 mL胰酶消化液（0.25%胰蛋白酶和0.53 mM EDTA），使其覆盖细胞表面。
  

• 将培养瓶置于37℃培养箱中，观察细胞变圆并开始脱落（约1-2分钟）。

• 加入适量培养基中和消化液，并轻轻吹打细胞使其完全悬浮。
  

• 转移细胞悬液至离心管，以1000 rpm离心4分钟。
  

• 弃去上清液，用1-2 mL新鲜培养基重悬细胞。

• 按1:2比例分配小鼠晶状体上皮细胞至新的培养瓶，加入8 mL培养基。
  

• 放回培养箱继续培养。

细胞冻存

• 收集生长良好的小鼠晶状体上皮细胞，转移至离心管中。
  

• 以1000 rpm离心4分钟，弃去上清液，用PBS清洗细胞一次。

• 使用血球计数板计数细胞，调整细胞密度至5×10⁶至1×10⁷/mL。
  

• 配制冻存液（90%培养基+10% DMSO），并混匀细胞悬液。

• 将1 mL细胞悬液加入冻存管，标注信息。
  

• 将冻存管放入程序降温盒中，以每分钟1℃降温速率降至-80℃，保存24小时后转移至液氮罐中长期储存。