PA-1细胞（人卵巢畸胎瘤细胞）

PA-1细胞系源自一名12岁白人女性卵巢畸胎瘤患者的腹腔积液，呈现上皮样形态，是贴壁生长的细胞系。

在特定条件下，如低血清浓度、低平板密度或经5-溴-2'-脱氧尿苷处理后，PA-1细胞可以形成紧密的编织状克隆，并能分化为胚状体。这些细胞表达胚胎抗原PCC4，但未检测到F9的表达。

PA-1细胞特性特征

• 胚胎抗原表达：表达胚胎抗原PCC4，但未检测到F9的表达。
  

• HLA抗原表达：表达HLA-A28和B12抗原。

• 酶活性：表现出葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）和同工酶B的活性。

• 癌基因表达：表达激活的N-ras癌基因。
  

• 致瘤性：在裸鼠体内具有高致瘤性。当皮下接种10^7个细胞时，21天内100%（5/5）形成肿瘤。
  

• 转移能力：具备腹水转移能力。

• 分化潜能：在特定条件下（如低血清浓度、低平板密度或经5-溴-2'-脱氧尿苷处理），可形成紧密的编织状克隆，并能分化为胚状体

PA-1人卵巢畸胎瘤细胞参数表

PA-1人卵巢畸胎瘤细胞培养教程

解冻步骤

• 将PA-1细胞冻存管在37°C水浴中快速解冻。

• 将解冻后的PA-1细胞悬液转移到含10 ml预热培养基的15 ml离心管中。

• 1000 rpm离心5分钟。

• 弃去上清液，用新鲜培养基重悬PA-1细胞。

• 将PA-1细胞悬液转移到培养瓶中，放入37°C、5% CO2培养箱中。

传代步骤

• 当PA-1细胞汇合度达到80-90%时进行传代。

• 弃去旧培养基，用PBS轻柔洗涤PA-1细胞1-2次。

• 加入适量0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，37°C消化2-3分钟。

• 通过显微镜观察，当PA-1细胞开始变圆并脱落时，轻拍培养瓶。

• 加入含血清的培养基以终止消化。

• 1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。

• 用新鲜培养基重悬PA-1细胞。

• 按1:4至1:10的比例将PA-1细胞接种到新的培养瓶中。

• 每周传代2-3次。

细胞活力检测

• 使用台盼蓝染色法

• 取0.5 ml PA-1细胞悬液，加入0.5 ml 0.4%台盼蓝染液。

• 混匀后，室温下染色2-3分钟。

• 取少量混合液放入血球计数板中。

• 显微镜下计数，蓝色为死细胞，无色透明为活细胞。

• 计算PA-1细胞的活细胞比例。

特殊处理

• 低血清条件培养：适用于特定实验，如PA-1细胞的分化实验。

• 5-溴-2'-脱氧尿苷处理：可促进PA-1细胞的分化。

注意事项

• 严格遵循无菌操作，避免PA-1细胞污染。

• 定期观察PA-1细胞的形态和生长状态。

• 避免过度消化，以免损伤PA-1细胞。

• 传代时保持适当的PA-1细胞密度。

• 定期进行支原体检测。

• 每3-4个月进行一次STR鉴定，以确保PA-1细胞系的纯度。

常见实验错误

• 无菌操作不当：未正确使用生物安全柜，可能引入PA-1细胞污染。

• 培养条件不适：温度、CO2浓度或湿度不合适，培养基配方或pH值不正确。

• 传代操作不当：过度消化损伤PA-1细胞，接种密度不适合。

• 细胞鉴定不足：未定期进行STR鉴定，忽视PA-1细胞的形态变化。

• 试剂使用不当：使用过期或污染的试剂；未按要求储存和使用试剂。

• 记录不完整：未详细记录PA-1细胞的实验过程和观察结果；缺乏细胞系来源和传代次数的记录。

• 细胞冻存和复苏操作不当：冻存保护剂使用不当；复苏过程操作不正确。

• 忽视细胞活力检测：未定期进行活力检测；使用活力低下的PA-1细胞进行实验。

• 交叉污染：同时处理多种细胞时未注意防止交叉污染。

• 环境因素忽视：忽视实验室温度、湿度等环境因素的影响。