小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞（原代细胞）

小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞主要来源于妊娠小鼠的胎盘组织，胎盘是一个在胚胎和母体之间起着至关重要作用的器官。它通过胚胎的胚膜和母体子宫内膜共同发育而成，承担着物质交换、激素分泌和胎儿保护等多种功能。胎盘的结构复杂，包括羊膜、绒毛膜以及蜕膜等部分，其中绒毛膜是胎盘的核心组成部分。绒毛膜通过滋养层细胞的作用与母体的子宫内膜建立了紧密的联系，形成了胎儿与母体之间的物质和气体交换通道。

绒毛膜由两层主要细胞构成：合体滋养细胞和细胞滋养细胞。合体滋养细胞位于绒毛膜的外层，具有侵入母体子宫壁的功能，帮助形成血管网络，这对于母胎之间的营养物质交换至关重要。细胞滋养细胞位于合体滋养细胞内层，主要发挥支持、保护以及免疫调节等作用。

小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的提取通常通过从妊娠小鼠的胎盘组织中分离获得。常用的方法是将胎盘组织经胰蛋白酶、DNA酶等消化液处理，分离出滋养层细胞并在体外进行培养，是研究胎盘生理、胚胎发育及免疫反应的重要工具。

小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞特性特征

• 标记物表达：绒毛膜滋养层细胞的分子特征包括细胞角蛋白7（Cytokeratin-7, CK7）的阳性表达。

• 激素分泌：滋养层细胞能够分泌多种激素，如人绒毛膜促性腺激素（hCG）、孕酮和雌激素等，这些激素在妊娠期间对维持妊娠至关重要。

• 基因表达：小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞的基因表达谱显示出与妊娠相关的多种基因，包括那些参与细胞增殖、分化和免疫调节的基因。例如，研究表明这些细胞中表达有与血管生成相关的基因，这对于形成胎盘内的血管网络至关重要。

• 功能调节：滋养层细胞在妊娠过程中通过调节自身的基因表达来适应母体环境，确保胎儿获得足够的营养和氧气，同时防止母体免疫系统对胎儿的攻击。

原代小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞参数表

小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞（原代细胞）培养教程

细胞培养步骤

• 清洁与消毒：用75%酒精擦拭培养瓶外表，确保培养器具无菌。
  

• 培养箱预热：将培养瓶置于37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱中静置30分钟，以提供适宜的小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞生长环境。

初始细胞复苏

• 从液氮中取出小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞后，迅速转移至37℃水浴中解冻约1-2分钟。

• 解冻后，将细胞悬液转移至离心管中，加入10 mL预热的完全培养基，离心（1000 rpm，5分钟）去除冷冻液。

• 将重悬的细胞接种于T25培养瓶中，补充完全培养基至5 mL，置于培养箱内培养。

传代操作

• 吸出旧培养基，用PBS缓冲液轻柔清洗1次，去除代谢废物。
  

• 加入1 mL 0.25%胰蛋白酶均匀覆盖细胞表面。
  

• 静置30秒后吸除多余消化液，置于37℃水浴中消化1-3分钟。

• 在显微镜下观察小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞形态，当细胞呈圆形并开始脱落时，立即加入3倍体积的完全培养基终止消化。

• 吸取消化后的细胞悬液，用吸管轻轻吹打分散细胞。
  

• 按1:2或1:3的比例接种到新培养瓶，补充至5 mL完全培养基后，将培养瓶放回培养箱。

细胞状态监控

• 形态观察：合体滋养细胞：较大且多核，紧密贴壁。

• 细胞滋养细胞：单核，梭形或多角形，呈分散贴壁状态。

• 污染检测：显微镜下定期观察小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞形态，确认无污染或形态异常。

注意事项

• 在小鼠胎盘绒毛膜滋养层细胞培养全过程中需严格保持无菌环境，避免细菌、真菌等外源性污染。

• 胰蛋白酶消化时间需适当，过度消化可能导致细胞损伤。

• 刚接种的细胞需静置，避免过多操作影响贴壁效率。