原代大鼠胎盘间充质干细胞

原代大鼠胎盘间充质干细胞（大鼠胎盘MSC细胞）是一类从大鼠正常胎盘组织中分离获得的多能干细胞。胎盘MSC细胞在体外培养时呈长梭状贴壁生长。胎盘分泌多种激素维持妊娠稳态。类似于某些爬行动物和鱼类在胎生过程中形成的辅助结构——假胎盘，胎盘均为物质交换提供了必要的结构支持。

胎盘间充质干细胞起源于中胚层，具有显著的自我更新和多向分化能力。在机体遭受组织损伤时，细胞能够在特定信号的诱导下定向迁移至损伤部位，聚集、增殖并沿不同分化途径转化为功能细胞，从而参与组织再生与修复。MSC细胞成为细胞治疗、组织工程和基因治疗等研究领域的重要细胞库。

大鼠胎盘间充质干细胞特性特征

• 表面标志物：CD44、CD29、CD105和CD166阳性；CD34、CD45和HLA-DR阴性。

• 传代扩增：传代扩增6代后仍保持干细胞特性。

• 多向分化能力：在一定条件下，可以分化成多种功能细胞，如脂肪细胞和骨细胞。
  

• 增殖活性：体外倍增能力旺盛，即使扩增1亿倍仍能保持其多向分化能力。

• 目前具体的基因表达谱未详细列出，但通常MSC会表达特定的干细胞基因。

大鼠胎盘间充质干细胞参数表

原代大鼠胎盘间充质干细胞培养教程

复苏操作

• 将含10% FBS的DMEM/F12培养基预热至37°C，为胎盘msc细胞复苏提供适宜温度；
  

• 准备无菌PBS以清洗细胞，确保胎盘msc细胞操作过程中的无菌环境。

• 从液氮储存中取出冻存管后，立即置于37°C水浴中迅速解冻，以尽快恢复胎盘msc细胞的活性；
  

• 解冻后，迅速将细胞悬液转移至无菌离心管中，加入1～2 mL预温培养基，轻柔吹打混合，避免胎盘msc细胞聚集；

• 以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液；

• 用无菌PBS洗涤细胞，彻底清除冻存液中的DMSO，保证胎盘msc细胞生长环境的纯净；

• 离心后，将细胞重悬于适量培养基中，均匀接种于6孔板或T25培养瓶中，使每个容器内的胎盘msc细胞分布均匀；

• 将培养容器置于37°C、5% CO₂培养箱中培养，24小时后观察胎盘msc细胞贴壁及生长情况，并根据需要补充培养基。

传代培养

• 当培养瓶中胎盘msc细胞的融合率达到70%～80%时，开始传代操作；
  

• 准备0.125%胰酶消化液和预热培养基，为胎盘msc细胞提供温和的消化环境。

• 弃去旧培养基后，加入适量胰酶消化液，对胎盘msc细胞进行消化，室温下约1～2分钟；
  

• 以预热培养基终止消化，轻柔吹打使胎盘msc细胞均匀分散；

• 将细胞悬液转移至无菌离心管中，1000 rpm离心5分钟后弃去上清液；

• 重悬细胞于新鲜培养基中，计数后按1×10⁴ cells/cm²的密度接种到新的培养容器中；

• 接种后的胎盘msc细胞继续在培养箱中培养，确保细胞状态稳定。

冻存保存

• 配制冻存液（常用FBS与DMSO按9:1体积比混合），为胎盘msc细胞提供保护性冻存环境；
  

• 准备无菌冻存管，确保所有试剂符合无菌要求，防止胎盘msc细胞受到污染。

• 当胎盘msc细胞生长状态良好时，弃去培养基后加入胰酶消化液，室温下消化1～2分钟；
  

• 加入预热培养基终止消化，轻柔吹打分散胎盘msc细胞；

• 将细胞悬液转移至离心管中，1000 rpm离心5分钟后弃去上清液；

• 以冻存液重悬细胞，调整胎盘msc细胞密度至2.5×10⁶ cells/mL；

• 将悬液分装至冻存管中（每管约1 mL）；

• 采用程序降温设备或标准冻存盒，在-80°C下预冻过夜，翌日迅速转入液氮罐中长期保存，以确保胎盘msc细胞长期活性不受损。