大鼠骨髓间充质干细胞（原代细胞）

大鼠骨髓间充质干细胞（简称BMSC细胞）是一种来源于中胚层的成体干细胞，具有高度的自我更新能力和多向分化潜能，能够分化为骨、软骨、肌肉、脂肪、神经等多种组织细胞，被广泛应用于细胞生物学研究、组织工程、细胞替代治疗、基因治疗及组织器官再造等领域。BMSC细胞主要从骨髓中分离，骨髓作为造血和免疫器官，分布于长骨（如股骨、胫骨）和扁平骨（如髂骨）的骨髓腔及稀松骨质间，具有海绵状结构。成年动物骨髓分为红骨髓和黄骨髓，红骨髓可生成红细胞、血小板和各种白细胞，承担造血和免疫功能；随着年龄增长，红骨髓部分被脂肪细胞替代形成黄骨髓，仅在某些扁平骨中保留红骨髓。骨髓间充质干细胞占骨髓有核细胞总数的比例极低，仅为0.001%-0.1%。BMSC细胞在治疗衰老相关疾病中表现出潜力，例如通过过表达TPP1改善老年大鼠BMSCs的衰老状态，提高其治疗缺血性心肌病的效果。

大鼠骨髓间充质干细胞特性特征

• 多向分化潜能：具有多向分化潜能，在体外诱导后可特异性染色显示脂质沉淀和骨结节，表达脂肪细胞和成骨细胞特异基因.

• 自我复制能力：具有自我复制功能，能够释放多种祖细胞，再分化为各种功能性的细胞，如肝细胞、骨细胞、脂肪细胞及内胚层来源的细胞.

• 表面标志物：表面分子CD29、CD44和CD90表达均高于95%；而造血系干细胞标记分子CD34和CD45表达低于5%.

• 其他特征：骨髓间充质干细胞还具有较高的增殖能力。在不同诱导条件下，可向中胚层细胞如脂肪细胞、成骨细胞、肌细胞等分化

大鼠骨髓间充质干细胞参数表

原代大鼠骨髓间充质干细胞培养教程

BMSC细胞复苏

• 从液氮罐中迅速取出冻存的BMSC细胞，确保细胞受冻时间最短。

• 立即将冻存管置于37℃水浴锅中快速解冻，轻轻摇晃，在1-2分钟内使细胞完全融化。

• 在无菌操作台内，用移液器将BMSC细胞悬液转移至15 mL离心管中，加入5 mL新鲜完全培养基稀释。

• 以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。

• 加入5 mL新鲜培养基重悬细胞，将BMSC细胞接种到一次性细胞培养瓶（25 cm²）中。

• 将培养瓶置于37℃、5% CO₂培养箱中培养，并注意培养基的pH稳定性。

• 每2天更换一次培养液，观察BMSC细胞贴壁生长情况。

BMSC细胞传代

• 当BMSC细胞贴壁生长且细胞融合度达到80%-90%时，可进行传代操作。

• 弃去培养瓶中的旧培养液，使用无钙镁的PBS缓冲液清洗细胞3次，去除残余培养基。

• 加入适量0.25%胰蛋白酶消化液，轻轻摇晃培养瓶，同时在倒置显微镜下观察细胞的变化。当BMSC细胞间连接消失、细胞呈游离状态时，迅速加入等量的完全培养基终止消化。

• 将细胞悬液转移至离心管中，以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。

• 用新鲜培养基重悬细胞，计数后按照一定比例（如1×10⁵细胞/mL）接种到新的培养瓶中。

• 加入适量完全培养基（如5 mL/25 cm²培养瓶），置于37℃、5% CO₂培养箱中培养。

BMSC细胞冻存

• 选择生长良好、处于对数生长期的BMSC细胞进行冻存。冻存前24小时更换新鲜培养基，确保细胞处于良好状态。

• 用0.25%胰蛋白酶消化细胞，将BMSC细胞消化至游离状态后，加入等量培养基终止消化，收集细胞悬液至离心管中。

• 以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液，加入预冷的冻存液（血清:DMSO=9:1），轻轻吹打使BMSC细胞分散均匀。

• 调节细胞浓度为5×10⁶~1×10⁷个/mL，将细胞悬液分装至冻存管中，每管1 mL。

• 将冻存管密封，并贴上标记清晰的标签（包括“BMSC细胞”种类、冻存日期等信息）。

• 将冻存管置于4℃环境下预冷30分钟，随后转移至-20℃冰箱4小时，再转入-80℃冰箱中过夜。最终，将BMSC细胞转移至液氮罐（-196℃）中长期保存。

BMSC细胞培养基

• 推荐使用专用的完全培养基（如含10%胎牛血清的DMEM培养基），同时确保培养环境为37℃、5% CO₂，培养基需每2-3天更换一次。