大鼠前体脂肪细胞（原代细胞）

大鼠前脂肪细胞主要来源于脂肪组织，是一种具有增殖能力并可分化为成熟脂肪细胞的特化前体细胞。在脂肪组织中，前脂肪细胞与成熟脂肪细胞共存：前者呈梭形，具备分裂和增殖能力，而后者因胞浆内脂滴积聚而呈圆形，并已丧失增殖能力。

大鼠前脂肪细胞通常通过分离脂肪组织获得，主要来源包括大网膜脂肪组织。相比成熟脂肪细胞，前脂肪细胞在形态上更接近成纤维细胞，并在适宜条件下逐步吸收脂质，最终分化为成熟脂肪细胞。这一过程在脂肪再生、组织修复及肥胖发生机制中起到关键作用。

前脂肪细胞因其较强的抗机械损伤能力，在组织工程领域也具有应用前景，被认为可作为软组织修复的潜在填充材料。其分化受炎症微环境调控，研究表明，炎症状态可影响前脂肪细胞的增殖及分化能力，从而调节脂肪组织的再生与功能重塑。

大鼠前体脂肪细胞特性特征

• 与肥胖的关系：前脂肪细胞与肥胖密切相关，是一类具有增殖和向脂肪细胞分化能力的特异化前体细胞。

• 细胞特性：贴壁生长，细胞形态为成纤维细胞样。
  

• 力学特性：对外界机械损伤的抵抗力较强，可望成为软组织缺损的有益填充物。

• 前脂肪细胞因子-1 (Pref-1)：免疫荧光染色为阳性。

• SREBP家族：SREBP-1a是所有SREBP反应基因的强激活剂，SREBP-1c可激活脂肪酸合成所需的基因转录，SREBP-2增强胆固醇合成。ADD1/ SREBP-1c mRN A 水平在诱导分化后24 h增加，暗示它在脂肪形成的早期发挥重要作用。

• C/EBP家族：C/EBPβ 和C/EBPδ 的表达很快增加，随后活化的C/EBPβ 和C/EBPδ可以激活C/EBPα。C/EBPα 基因启动子上具有C/EBP调节元件，该元件能结合 C/EBPα 进而激活其自身表达，维持分化状态。

大鼠前体脂肪细胞参数表

原代大鼠前体脂肪细胞培养教程

细胞复苏

• 准备工作：取适量完全培养基，在37℃水浴中预热。

• 解冻细胞：从液氮中取出大鼠前脂肪细胞冻存管，迅速放入37℃水浴中轻轻摇晃，使细胞液完全溶解。

• 离心：将细胞悬液转移至15 mL离心管中，加入5 mL预热培养基，1000 rpm离心4分钟，弃去上清液。

• 重悬细胞：加入1-2 mL完全培养基，轻轻吹打使前脂肪细胞均匀分散。

• 培养：将细胞悬液接种至培养瓶或培养皿（如T25瓶加入6 mL培养基，10 cm皿加入8 mL培养基），置于37℃、5% CO₂培养箱中培养过夜。

• 更换培养基：次日更换新鲜培养基，并观察前脂肪细胞贴壁及生长状态。

细胞传代

• 观察细胞密度：当前脂肪细胞密度达到80%-90%时，可进行传代。

• 清洗细胞：弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

• 消化细胞：加入1 mL 0.25% Trypsin-0.53mM EDTA消化液，置于37℃培养箱消化1-2分钟，显微镜下观察细胞状态，待细胞变圆并脱落后取出。

• 终止消化：轻敲培养瓶后，加入少量培养基终止消化。

• 离心：加入6-8 mL培养基，轻轻混匀后吸出，1000 rpm离心4分钟，弃去上清液。

• 重悬细胞：加入1-2 mL培养基后轻轻吹匀。

• 传代：按1:2比例将前脂肪细胞悬液接种至新的培养皿或瓶中，加入适量培养基（如10 cm皿加入8 mL培养基）。

• 培养：将培养瓶置于37℃、5% CO₂培养箱中继续培养。

• 更换培养基：细胞贴壁后，每3天更换一次培养基。

细胞冻存

• 准备冻存液：通常使用含有DMSO的培养基或专用细胞冻存液。

• 收集细胞：按照传代步骤收集前脂肪细胞，并调整细胞密度。

• 加入冻存液：将细胞重悬于冻存液中，使细胞密度达到适当浓度。

• 冻存：将细胞分装至冻存管中，先在4℃放置10-15分钟，然后依次转移至-20℃、-80℃冰箱，最终存入液氮中长期保存。