
大鼠前体脂肪细胞(原代细胞)
- 来源:脂肪组织
- 细胞特征:贴壁细胞 , 成纤维细胞样
- 培养基:原代细胞专用培养基
- 其他:CD90、CD73和CD29表达阳性,CD34、CD45和CD11b/c呈阴性表达
大鼠前脂肪细胞主要来源于脂肪组织,是一种具有增殖能力并可分化为成熟脂肪细胞的特化前体细胞。在脂肪组织中,前脂肪细胞与成熟脂肪细胞共存:前者呈梭形,具备分裂和增殖能力,而后者因胞浆内脂滴积聚而呈圆形,并已丧失增殖能力。
大鼠前脂肪细胞通常通过分离脂肪组织获得,主要来源包括大网膜脂肪组织。相比成熟脂肪细胞,前脂肪细胞在形态上更接近成纤维细胞,并在适宜条件下逐步吸收脂质,最终分化为成熟脂肪细胞。这一过程在脂肪再生、组织修复及肥胖发生机制中起到关键作用。
前脂肪细胞因其较强的抗机械损伤能力,在组织工程领域也具有应用前景,被认为可作为软组织修复的潜在填充材料。其分化受炎症微环境调控,研究表明,炎症状态可影响前脂肪细胞的增殖及分化能力,从而调节脂肪组织的再生与功能重塑。
大鼠前体脂肪细胞特性特征
与肥胖的关系:前脂肪细胞与肥胖密切相关,是一类具有增殖和向脂肪细胞分化能力的特异化前体细胞。
细胞特性:贴壁生长,细胞形态为成纤维细胞样。
力学特性:对外界机械损伤的抵抗力较强,可望成为软组织缺损的有益填充物。
前脂肪细胞因子-1 (Pref-1):免疫荧光染色为阳性。
SREBP家族:SREBP-1a是所有SREBP反应基因的强激活剂,SREBP-1c可激活脂肪酸合成所需的基因转录,SREBP-2增强胆固醇合成。ADD1/ SREBP-1c mRN A 水平在诱导分化后24 h增加,暗示它在脂肪形成的早期发挥重要作用。
C/EBP家族:C/EBPβ 和C/EBPδ 的表达很快增加,随后活化的C/EBPβ 和C/EBPδ可以激活C/EBPα。C/EBPα 基因启动子上具有C/EBP调节元件,该元件能结合 C/EBPα 进而激活其自身表达,维持分化状态。
大鼠前体脂肪细胞参数表
细胞名称 | 大鼠前体脂肪细胞(原代细胞) |
英文名称 | Rat Preadipocyte Cells |
细胞类型 | 前脂肪细胞(pre-adipocyte) |
细胞形态 | 梭形,类似于成纤维细胞 |
组织来源 | 脂肪组织(白色脂肪组织或棕色脂肪组织) |
生长方式 | 贴壁 |
细胞特性 | 具有增殖和分化为脂肪细胞的能力 |
细胞大小 | 脂肪细胞直径范围从不到20µm到300μm |
培养基 | 大鼠前脂肪细胞专用完全培养基,或低糖DMEM/F12 |
二氧化碳浓度 | 5% |
温度 | 37℃ |
换液频率 | 每2-3天 |
消化液 | 0.25%胰蛋白酶-EDTA |
培养耗材 | 细胞培养瓶、皿(组织培养处理) |
培养密度 | 建议参考相关文献,根据具体实验目的调整 |
Pref-1 | 免疫荧光染色为阳性 |
SREBP家族 | SREBP-1a, SREBP-1c, SREBP-2 |
C/EBP家族 | C/EBPβ, C/EBPδ, C/EBPα |
PPARγ | 参与脂肪细胞分化调控 |
Lipin基因 | Lipin1 (脂肪组织高表达), Lipin2 (肝脏高表达) |
脂肪分解相关酶 | 脂肪组织甘油三酯脂肪酶(ATGL),激素敏感脂肪酶(HSL),甘油单酯脂肪酶(MGL) |
UCP1 | 棕色脂肪细胞特有,参与非颤抖产热 |
冻存液 | 含10% DMSO的完全培养基或专用冻存液 |
传代比例 | 1:2 ~ 1:5 (根据细胞生长状态调整) |
培养箱湿度 | 饱和湿度 |
胶原酶消化 | 分离前脂肪细胞方法之一,用于处理脂肪垫组织 |
脂肪含量相关性 | IUGR大鼠中,Lipin1和Lipin2的表达与肝脏脂肪含量呈正相关 |
脂肪细胞大小 | 高脂饮食喂养的雄性小鼠,性腺周围脂肪组织中单个脂肪细胞面积明显增大 |
培养教程
原代大鼠前体脂肪细胞培养教程
细胞复苏
准备工作:取适量完全培养基,在37℃水浴中预热。
解冻细胞:从液氮中取出大鼠前脂肪细胞冻存管,迅速放入37℃水浴中轻轻摇晃,使细胞液完全溶解。
离心:将细胞悬液转移至15 mL离心管中,加入5 mL预热培养基,1000 rpm离心4分钟,弃去上清液。
重悬细胞:加入1-2 mL完全培养基,轻轻吹打使前脂肪细胞均匀分散。
培养:将细胞悬液接种至培养瓶或培养皿(如T25瓶加入6 mL培养基,10 cm皿加入8 mL培养基),置于37℃、5% CO₂培养箱中培养过夜。
更换培养基:次日更换新鲜培养基,并观察前脂肪细胞贴壁及生长状态。
细胞传代
观察细胞密度:当前脂肪细胞密度达到80%-90%时,可进行传代。
清洗细胞:弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
消化细胞:加入1 mL 0.25% Trypsin-0.53mM EDTA消化液,置于37℃培养箱消化1-2分钟,显微镜下观察细胞状态,待细胞变圆并脱落后取出。
终止消化:轻敲培养瓶后,加入少量培养基终止消化。
离心:加入6-8 mL培养基,轻轻混匀后吸出,1000 rpm离心4分钟,弃去上清液。
重悬细胞:加入1-2 mL培养基后轻轻吹匀。
传代:按1:2比例将前脂肪细胞悬液接种至新的培养皿或瓶中,加入适量培养基(如10 cm皿加入8 mL培养基)。
培养:将培养瓶置于37℃、5% CO₂培养箱中继续培养。
更换培养基:细胞贴壁后,每3天更换一次培养基。
细胞冻存
准备冻存液:通常使用含有DMSO的培养基或专用细胞冻存液。
收集细胞:按照传代步骤收集前脂肪细胞,并调整细胞密度。
加入冻存液:将细胞重悬于冻存液中,使细胞密度达到适当浓度。
冻存:将细胞分装至冻存管中,先在4℃放置10-15分钟,然后依次转移至-20℃、-80℃冰箱,最终存入液氮中长期保存。
相关资料
STR鉴定及相关
参考文献
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- 摘要:脂肪细胞的增殖、分化与肥胖和胰岛素抵抗等代谢性疾病有密切的关系,而传统中药在治疗各种疾病方...
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