小鼠脂肪干细胞（原代细胞）

小鼠脂肪干细胞（Adipose-derived Stem Cells, ADSCs）是从小鼠脂肪组织中分离出的具有多向分化潜能的间充质干细胞，是再生医学和组织工程研究中的重要种子细胞。小鼠脂肪干细胞主要来源于成年小鼠的腹部、腹股沟或大腿区域的脂肪组织，通常以4周龄的雄性小鼠为实验模型（如ICR品系），通过外科手术获取脂肪组织后，结合酶解和分离技术提取获得。

小鼠脂肪干细胞具有显著的自我更新能力和多向分化潜力，可分化为脂肪、骨、软骨等多种细胞类型，且来源广泛、获取相对容易，对供区损伤小，并在体外扩增效率高，适合大规模培养需求。脂肪组织不仅是能量储存的重要部位，还是调控胰岛素敏感性、血压、炎症反应等多种生理功能的内分泌器官，小鼠脂肪干细胞在组织修复、细胞再生及抗衰老等方面具有重要应用价值，其在改善亚健康状态及推动再生医学技术发展中发挥了重要作用。

小鼠脂肪干细胞特性特征

• 自我更新能力：小鼠脂肪干细胞能够在体外长期培养而不失去增殖能力，具有良好的自我更新能力。

• 多向分化潜能：可以分化为多种细胞类型，包括脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞和心肌细胞等，显示出较强的多向分化潜力。

• 来源丰富：主要来源于成年小鼠的脂肪组织，获取过程相对简单且创伤较小。

• 高增殖速率：在适当的培养条件下，小鼠脂肪干细胞的体外扩增速率较高，能够快速获得大量细胞。

• 表面标志物：小鼠脂肪干细胞通常表达一系列特定的表面标志物，如CD29、CD44、CD90等，而几乎不表达CD45。这些标志物是鉴定间充质干细胞的重要指标。
  

• 基因表达：ADSCs在分化过程中会表现出不同的基因表达模式。例如，在向脂肪细胞分化时，会上调PPARγ、C/EBPα等与脂肪生成相关的转录因子。

• 增殖特征：在低代次（如第3代）时，ADSCs表现出良好的增殖能力和活性，而高代次（如第30代）时可能出现衰老现象，增殖能力下降.
  

• 转录因子的表达：ADSCs在不同诱导条件下会表现出不同的转录因子活性，这些转录因子对于其向特定细胞类型的分化至关重要。例如，成骨分化过程中会激活Runx2等成骨相关基因，而脂肪分化则涉及PPARγ和C/EBPβ等基因的表达。
  

• 基因组稳定性：随着传代次数的增加，ADSCs可能会出现染色体异常和DNA含量变化，这些变化可能影响其功能和应用

小鼠脂肪干细胞参数表

原代小鼠脂肪干细胞培养教程

细胞复苏

• 消毒：使用75%酒精对培养瓶和操作台进行消毒处理。

• 细胞解冻：将冻存管中的脂肪干细胞迅速放入37℃水浴中，轻轻摇动，1-2分钟内解冻完全。

• 稀释DMSO：将解冻后的脂肪干细胞悬液转移至含有9 mL完全培养基的15 mL无菌离心管中。

• 离心：以1000 rpm离心5分钟，去除上清，保留细胞沉淀。

• 重悬细胞：用1-2 mL完全培养基重悬细胞沉淀，确保脂肪干细胞分散均匀。

• 培养：将重悬后的脂肪干细胞移至培养瓶中，加入适量培养基，放入37℃、5% CO₂培养箱中培养，次日更换培养基以去除残留的DMSO。

细胞传代

• 观察细胞生长状态：当脂肪干细胞生长至80%-90%汇合时进行传代。

• 洗涤：吸弃培养基，加入PBS润洗细胞1次以去除残留血清。

• 消化：加入适量0.25%胰酶覆盖细胞层，将培养瓶置于37℃培养箱中1-2分钟，直至脂肪干细胞开始收缩变圆。

• 终止消化：加入1倍体积完全培养基中和胰酶，轻轻拍打培养瓶底使脂肪干细胞脱落。

• 离心：将细胞悬液转移至15 mL离心管中，以1000 rpm离心5分钟，去除上清。

• 重悬和分瓶：用完全培养基重悬脂肪干细胞沉淀，根据实验需求按1:3或1:4比例进行分瓶，加入新鲜培养基后继续培养。

细胞冻存

• 收集细胞：按照传代方法消化脂肪干细胞，并用培养基中和胰酶后离心收集细胞沉淀。

• 细胞计数：使用台盼蓝法进行脂肪干细胞活性评估，确保细胞密度为1 × 10⁶个/mL。

• 制备冻存液：用预冷的冻存液重悬脂肪干细胞沉淀，确保混匀。

• 装管：将脂肪干细胞悬液分装至冻存管中，每管1 mL。

• 程序冻存：将冻存管置于程序冻存盒中，在-80℃冻存过夜，然后转移至液氮中长期保存。

注意事项

• 培养条件：确保培养环境稳定（37℃、5% CO₂），定期观察脂肪干细胞状态，及时更换培养基。

• 操作无菌：所有操作需在无菌条件下进行，以防止污染。

• 细胞密度控制：复苏和传代时应严格控制脂肪干细胞密度，以保证细胞的增殖和分化能力。