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3T3-L1细胞培养常见问题
思泰默公司是否对3T3-L1细胞系的脂肪细胞形成进行检测？
本公司对3T3-L1细胞系脂肪细胞的形成包进行了检测，并且所有批次都列出脂肪细胞分化的指标。本公司的方案让细胞达到融合，在大约2周内观察脂滴的形成。我们没有用地塞米松、IBMX和胰岛素的混合物诱导3T3-L1的分化。
为了保证所有批次的3T3-L1细胞都显示出脂肪细胞分化，我们有如下过程：用一个烧瓶混合（使用补充有思泰默配套的胎牛血清和培养液）。每周更换两次液体，观察细胞是否有脂肪细胞形成的迹象。在所有批次的3T3-L1细胞中，脂肪积累在100%汇合后约5天开始，并且在汇合后15-16天后有50%分化为脂肪细胞。所检查的每个领域都有带有细胞质液滴的细胞灶。
参考文献：
建立的脂肪前细胞系及其在培养中的分化。Cell 3:127-1331974 PubMed:75037596
细胞1，113-116 1974
《细胞》第5期，1975年第19-27页
3T3-L1细胞的推荐细胞密度和培养条件是什么？
3T3-L1细胞应在仅3×103个细胞/cm2的推荐接种密度下开始培养，并应在培养物达到70%至80%融合之前，或当细胞达到5×104至6×104个活细胞/cm2时进行亚培养。细胞培养物的低密度会使培养瓶显得稀疏，这是正常的。产品质量检测报告上的特定批次信息提供细胞/小瓶的数量。3T3-L1细胞的存活率不能仅通贴壁细胞着来确定，因为在从冷冻保存中恢复的过程中也有漂浮细胞的存活。应通过温和的离心作用保留漂浮的细胞，并将其添加回细胞群体中。
该细胞系的基础培养基是思泰默配套培养基，其补充有小牛血清至10%的最终浓度。当复苏和传代3T3-L1细胞时，根据培养基中的碳酸氢钠浓度适当调节CO2环境是非常重要的。非思泰默制剂外的DMEM制剂可能含有更高的碳酸氢钠（3.7g/L），并且在培养这些细胞时需要增加的CO2水平（7-10%）。
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