
小鼠原代前脂肪细胞
- 来源:脂肪组织
- 细胞特征:贴壁细胞 , 成纤维细胞样
- 培养基:原代细胞专用培养基
- 其他:在含胰岛素、地塞米松和异丁基甲基黄嘌呤(IBMX)的分化培养基中,前脂肪细胞可分化为脂肪细胞,并储存甘油三酯形成脂滴。
小鼠原代前脂肪细胞是从小鼠白色脂肪组织(如附睾脂肪、肾周脂肪和皮下脂肪)中分离获得的一类未成熟脂肪细胞,具有显著的增殖能力,并可分化为成熟脂肪细胞。在形态上,前脂肪细胞呈梭形,随着分化进程逐步积聚脂滴,最终转变为成熟的圆形成熟脂肪细胞,这些成熟细胞以胞浆中单一大脂滴为特征,已丧失分裂能力。
前脂肪细胞在体内外均能分泌多种脂肪因子,参与能量代谢、内分泌调节和炎症反应,在肥胖及相关代谢疾病中发挥重要作用。作为脂肪组织中重要的细胞组分,前脂肪细胞不仅是研究脂肪组织功能的理想工具,还被认为在软组织修复等领域具有潜在的应用价值。
小鼠原代前脂肪细胞特性特征
前脂肪细胞具有增殖能力,能够在体外进行多次分裂,并在适当条件下向成熟脂肪细胞分化。
小鼠原代前脂肪细胞在体内和体外都参与能量代谢,并在肥胖及相关代谢疾病中发挥重要作用。
标志物表达:前脂肪细胞因子-1(Pref-1)是其特征性标志物,显示为阳性。
在分化过程中,前脂肪细胞会表达多种与脂肪细胞功能相关的基因,如PPARγ(过氧化物酶体增殖物激活受体γ)、C/EBPα(CCAAT增强子结合蛋白α)、FASN(脂肪酸合成酶)等,这些基因在脂肪细胞的分化和功能中起关键作用。
在分化过程中,PPARγ和C/EBPα的表达量通常随着时间的推移而增加,在前脂肪细胞向成熟脂肪细胞转变中的重要作用。
其他关键基因如HSL(激素敏感性甘油三酯脂肪酶)也在分化过程中表现出显著的表达变化,反映了脂肪代谢的调节机制。
小鼠原代前脂肪细胞不仅参与能量储存,还通过分泌多种生物活性因子影响胰岛素敏感性、血压水平、内皮功能、纤溶活动及炎症反应等多种生理过程。
由于其对外界机械损伤的抵抗力较强,前脂肪细胞被认为有潜力作为软组织缺损的填充材料
小鼠原代前脂肪细胞参数表
细胞名称 | 小鼠原代前脂肪细胞(Preadipocytes) |
英文名称 | Mouse Preadipocyte Cells |
来源 | 小鼠白色脂肪组织(附睾、肾周、皮下脂肪) |
细胞形态 | 梭形,贴壁生长 |
细胞纯度 | 高于90% |
鉴定标志物 | 前脂肪细胞因子-1(Pref-1)免疫荧光染色阳性 |
不含病原体 | 不含HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌 |
培养基 | F12培养基或DMEM/F12,添加10%胎牛血清(FBS)和抗生素(青霉素和链霉素) |
培养条件 | 37℃,5% CO₂ |
接种密度 | 1.5×10⁴个/cm² |
换液频率 | 每3天更换一次培养基 |
培养时间 | 通常可维持1-2周,具体视实验需求而定 |
分化培养基 | DMEM/F12添加10% FBS及分化因子(如胰岛素、地塞米松等) |
分化时间 | 通常为7-14天,具体取决于实验设计 |
关键基因 | PPARγ、C/EBPα、FASN、HSL等 |
基因表达监测 | qPCR和Western blot用于检测关键基因的表达水平 |
生物学功能 | 参与能量代谢、内分泌调节,影响胰岛素敏感性、血压水平等; 对外界机械损伤的抵抗力较强,有潜力作为软组织缺损的填充材料 |
细胞活性测定 | CCK-8法用于评估细胞活性 |
油红O染色 | 用于鉴定成熟脂肪细胞的脂滴形成 |
注意事项 | 建议用多聚赖氨酸 PLL(0.1mg/ml)或明胶(0.1%)对接种培养皿包被处理 |
培养教程
小鼠原代前脂肪细胞培养教程
细胞培养
将重悬后的小鼠原代前脂肪细胞以1.5×10⁴个/cm²的密度接种至培养皿或培养瓶中。
初始培养时,将细胞置于37℃、5% CO₂培养箱中孵育24小时。
24小时后,用无菌PBS轻轻洗去未贴壁细胞,并更换为新鲜完全培养基,继续培养小鼠原代前脂肪细胞。
每3天更换培养基,确保培养环境稳定,同时定期观察细胞形态和生长状态。
注意事项
实验全程需严格无菌,以防止污染对小鼠原代前脂肪细胞的影响。
胶原酶溶液的浓度及消化时间需严格控制,过度消化可能损伤细胞,而消化不足会影响小鼠原代前脂肪细胞的分离效果。
过滤步骤务必仔细,离心速度应适中,以提高小鼠原代前脂肪细胞的纯度并保证其活性。
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