小鼠原代脂肪细胞

原代小鼠脂肪细胞来源于脂肪组织。小鼠脂肪细胞主要分为白色脂肪细胞和褐色（棕色）脂肪细胞，白色脂肪细胞主要分布在皮下脂肪、附睾脂肪和肾周脂肪等部位，胞内含有单个大脂质泡，主要负责储存能量，并在机体需要时分解脂肪供能，白色脂肪细胞和前脂肪细胞主要从皮下脂肪、附睾脂肪和肾周脂肪中获取；褐色（棕色）脂肪细胞富含线粒体，含有多个小脂质泡，主要分布于肩胛骨间、颈背部、腋窝、纵隔及肾脏周围，通过线粒体解偶联蛋白（UCP1）直接将脂肪转化为热量以维持体温，褐色脂肪细胞则取自肩胛骨间的褐色脂肪组织。

小鼠脂肪组织中还存在前脂肪细胞和脂肪干细胞，前脂肪细胞具备向成熟脂肪细胞分化的能力，而脂肪干细胞具有自我更新和多向分化潜力，能够分化为脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞等，是脂肪组织再生和修复的关键细胞，脂肪干细胞同样可从白色脂肪组织中分离。小鼠脂肪细胞已广泛应用于代谢调控、肥胖和糖尿病等疾病的研究。

小鼠原代脂肪细胞类型

• 白色脂肪细胞

• 脂滴结构：单泡结构，脂滴占据细胞体积90%以上，含光面内质网。

• 细胞形态：成熟后呈圆形，核被挤压成“半月形”。

• 分布：皮下（如腹股沟）和内脏（如附睾、肾周）脂肪库。

• 棕色/米色脂肪细胞

• 脂滴结构：多房性小脂滴，富含线粒体和UCP1蛋白。

• 产热结构：线粒体嵴密集，通过解偶联产热。

• 分布：肩胛间区、颈背部、纵隔及肾脏周围。

• 前脂肪细胞

• 形态：梭形，贴壁生长，具有增殖能力。

• 分化潜力：可分化为成熟脂肪细胞，分化过程中脂滴逐渐累积

分子与基因特征

小鼠原代脂肪细胞特性特征

• 分化调控：PPARγ 和 C/EBPα 在分化中表达逐步升高，驱动脂肪生成。

• 代谢相关基因：FASN（脂肪酸合成酶）、HSL（激素敏感性脂肪酶）、UCP1（棕色/米色细胞）

• 白色脂肪细胞：储存甘油三酯，释放脂肪酸供能、分泌脂肪因子调节胰岛素敏感性、炎症反应；

• 棕色/米色脂肪细胞：通过UCP1介导非颤抖性产热，调节体温；冷刺激下激活产热基因（如PGC1-α）；

• 前脂肪细胞：参与脂肪组织再生与修复，分泌IL-6等炎症因子

• 肥胖与代谢疾病：白色脂肪功能紊乱导致脂毒性及胰岛素抵抗。

• 衰老相关变化：衰老脂肪组织中促炎细胞增加（如Dusp10↓、Id3↑）

• 皮下脂肪（sWAT）与内脏脂肪（vWAT）在代谢疾病易感性上表现不同

• 小鼠锁骨上脂肪库富含米色脂肪细胞，冷刺激下可褐变

小鼠原代脂肪细胞参数表

小鼠原代脂肪细胞培养教程

小鼠脂肪细胞复苏

• 取出冻存管，将其迅速置于37℃水浴中，轻柔摇晃直至冰晶完全溶解，过程不宜超过1分钟，以免影响小鼠脂肪细胞活性。  

• 向冻存管中逐步加入1ml预温培养基混匀，转移至15ml离心管，再加入4ml培养基稀释。  

• 以300×g离心5分钟，弃去上清液。  

• 用1ml培养基重悬小鼠脂肪细胞，并将细胞悬液以1×10⁵ cells/cm²的密度接种到经过基质胶包被的培养皿中。  

• 将培养皿置于37℃、5% CO₂培养箱中，24小时后观察小鼠脂肪细胞的贴壁情况，48小时后更换培养基。  

小鼠脂肪细胞传代

• 吸弃培养基，用PBS清洗两遍。加入胰酶-EDTA溶液（1ml/25cm²），在37℃孵育3-5分钟，直至小鼠脂肪细胞大部分脱落。  

• 加入等体积含10% FBS的培养基终止胰酶反应，并用移液枪轻柔吹打，使小鼠脂肪细胞形成单细胞悬液。  

• 以300×g离心5分钟，弃去上清液，重悬于新鲜培养基中。  

• 根据细胞密度调整至5×10⁴ cells/ml，以1:2至1:3的比例传代至新培养皿。  每48小时更换培养基，待小鼠脂肪细胞融合度达到80%-90%时可再次传代。  

• 注：前脂肪细胞建议传代1-2次，避免分化能力下降。

小鼠脂肪细胞冻存

• 收集对数生长期小鼠脂肪细胞，以300×g离心5分钟，弃去上清液。  

• 调整细胞密度至1×10⁶ cells/ml，缓慢加入等体积的预冷冻存液混匀。  

• 程序降温：4℃预冷：静置20分钟；降温至-30℃：以1-2℃/min的速率进行程序降温；液氮储存：最终将冻存管转移至液氮中长期保存。  

• 复苏后检测：使用台盼蓝染色法检测小鼠脂肪细胞存活率，需确保存活率>85%。  

小鼠脂肪细胞分化诱导

• 对于前脂肪细胞，可通过成脂诱导液促进其分化为成熟脂肪细胞。  

• 诱导液配方：- BMP4（3.3nM）  、胰岛素（10μg/ml）  、地塞米松（1μM）  

• 分化检测：油红O染色：检测脂滴形成情况。qPCR检测：分析脂肪分化标志物基因（PPARγ、C/EBPα）表达水平。  

小鼠脂肪细胞培养常见问题及解决方案