ADSCs细胞（人脂肪干细胞永生化） （暂不提供）

人脂肪干细胞（ADSCs细胞）永生化通常通过慢病毒转染技术实现，在细胞基因组中导入端粒酶逆转录酶（TERT）基因，并结合抗生素筛选及多次传代，从而获得具备稳定增殖能力的细胞株。脂肪干细胞凭借来源丰富、获取相对简单以及扩增能力突出越来越受到重视。ADSCs细胞形态类似成纤维细胞，具备强大的增殖潜力，并可在特定诱导条件下分化为脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞和上皮细胞等多种类型，显示出多向分化潜能。

ADSCs（Adipose-Derived Stem Cells，即人脂肪来源间充质干细胞）是最常见的一类成体多能干细胞。主要通过胶原酶消化皮下脂肪组织获得，在脂肪组织基质血管分离出的细胞群中，具备贴壁特性的即为ADSCs，约占其中的3%左右。作为来源于中胚层的间充质干细胞，ADSCs具有自我更新和多向分化能力，体外培养条件下易于扩增且衰老速度较慢。ADSCs细胞还能通过分泌血管生成因子（如HGF、VEGF、TGF-β）和抗炎因子，发挥旁分泌调控作用，促进血管新生和组织修复。值得注意的是，不同部位脂肪来源的ADSCs细胞在增殖速度、分化潜力及基因表达上存在一定差异，具有一定的“来源依赖性”。

ADSCs细胞在临床与科研中的应用十分广泛。已被应用于骨与软骨缺损修复、心血管组织再生、神经损伤修复等研究，并在再生医学和细胞治疗中被视为理想的种子细胞。同时，ADSCs细胞在多项临床试验中展现出良好的抗炎、抗凋亡及促进组织再生的潜力。此外，通过外泌体及分泌因子调节细胞微环境，ADSCs能够有效促进组织功能恢复和再生，为未来的细胞治疗与组织工程提供了坚实的实验基础和应用前景。

ADSCs人脂肪干细胞永生化特性特征

• ADSCs细胞属于间充质干细胞（MSCs）类群，表达典型的MSC标志物，如CD10、CD13、CD29、CD44、CD49b、CD73、CD90、CD105等。

• ADSCs细胞通常不表达造血系及内皮细胞标志物，如CD14、CD31、CD34、CD45和HLA-DR。

• 分化诱导过程中，ADSCs细胞可表达多种特异性蛋白和基因，如向神经样分化时诱导表达S-100β、P75和GFAP等标志物，显示其多向分化潜力。

• 在增殖状态下，ADSCs细胞呈短梭形或多边形，排列成簇状、漩涡状，具有良好的贴壁生长和增殖能力。

• ADSCs细胞表达多种调控干细胞自我更新、多向分化的基因，包括干细胞标志基因（如Oct4、Sox2、Nanog）以及参与脂肪、骨、软骨、神经等细胞系分化的相关基因。

• miRNA在ADSCs细胞分化过程中起关键调控作用，调控脂肪细胞分化的miRNA包括miR-21、miR-30c、miR-148a、miR-125a-3p等，通过调节TGF-β、Wnt等信号通路影响细胞命运。

• miR-21通过下调TGF-β受体2解除对成脂分化的抑制，miR-145促进向平滑肌细胞分化。

• ADSCs细胞具有强大的增殖能力，早期传代中细胞增殖活跃，能保持细胞形态和基因表达的稳定性。

• 免疫调节性强，ADSCs细胞能分泌多种细胞因子和生长因子（如VEGF、HGF、TGF-β），在组织修复和免疫调节中发挥作用。

• 多向分化潜能，ADSCs细胞可分化为脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞、神经细胞、肌细胞等。

ADSCs细胞参数表

永生化人脂肪干细胞与原代ADSCs细胞对比

ADSCs人脂肪干细胞永生化培养教程

adscs细胞复苏

• 在生物安全柜中进行操作，酒精消毒操作台与培养器皿。

• 从液氮取出adscs细胞冻存管，迅速置于37℃水浴中摇晃，1–2分钟解冻。

• 将细胞悬液转移至无菌离心管中，加入预热完全培养基稀释，降低DMSO浓度。

• 1000 rpm离心5分钟，弃去上清。

• 用新鲜完全培养基重悬细胞并接种入培养瓶。

• 放入培养箱，次日更换培养液去除残余DMSO。

adscs细胞传代

• 当细胞达80%–90%汇合时，弃去培养液并PBS清洗一次。

• 加入适量0.25%胰酶，37℃消化1–2分钟，细胞变圆时终止消化。

• 加入等体积培养基中和胰酶，轻轻拍打瓶壁使细胞脱落。

• 转入离心管，1000 rpm离心5分钟，弃去上清。

• 用完全培养基重悬，按1:3–1:4比例分瓶继续培养。

adscs细胞冻存

• 选择对数生长期、约80%汇合的细胞，PBS清洗并胰酶消化收获。

• 将细胞重悬于冻存液中，调整浓度至1–5×10⁶个/mL。

• 分装于冻存管，放入程序降温盒内，以1℃/分钟速度在-80℃冷冻过夜。

• 次日将冻存管移至液氮罐长期保存。

注意事项

• 全程操作需在无菌条件下进行，避免污染。

• adscs细胞复苏后应及时换液，防止DMSO对细胞产生毒性。

• 冻存液必须现配现用，保证细胞存活率。

• 传代次数过高可能影响adscs细胞的分化潜能，需做好传代记录。