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掌握HepG2细胞培养技巧：常见问题一览
摘要：HepG2细胞是一种来源于人肝癌的细胞系，在肝癌研究、药物筛选等领域有着重要的应用价值。
问：HepG2细胞为什么会呈现叠加生长的现象？
答：HepG2细胞生长特性是紧密连接成片状从四周延展增殖，形成一座座的小岛状，因此在增殖过程中可能会出现轻微的细胞堆积，这是正常现象。在消化过程中，需要耐心等待细胞自然脱落，切勿拍打培养瓶或过度吹打细胞，以免损伤细胞。
问：HepG2细胞培养过程中贴壁速度慢、漂浮细胞多怎么办？
答：HepG2细胞传代后会有许多簇状仍处于悬浮状态，这是正常现象。建议在传代后的2-3天内减少对细胞的观察和移动。冻存后复苏的细胞通常会出现大量漂浮细胞，这也是正常现象。如果漂浮细胞仍然存在且较多，且具有良好的细胞活性，可以在3天后重新收集并接种到新的培养瓶中。此外，若需要加快细胞贴壁速度，可以考虑将血清浓度提高至15%。
问：HepG2细胞培养中出现的空泡现象是什么情况？
答：HepG2细胞中出现的空泡是正常现象，不会影响细胞的生长，无需过分担心。
问：为什么HepG2细胞生长速度慢？
答：在适宜的培养条件下，HepG2细胞在T25培养瓶中以1:2传代后，通常需要2-3天才能达到80%的汇合率。如果细胞生长过慢或不生长，可以考虑将血清浓度增加至15%-20%，待细胞恢复正常生长后再将血清比例降至10%。此外，细胞接种密度不可过低，否则也会导致生长速度缓慢。
问：如何解决HepG2细胞聚团或不贴壁的问题？
答：HepG2细胞贴壁性受到血清品牌和培养基pH的影响。为了更好地促进细胞贴壁，建议使用高质量、低内毒素、未灭活的胎牛血清。另外，及时观察培养器皿中培养基的颜色，偏黄时及时换液，偏紫时检查CO2供应是否正常，培养瓶是否透气，并及时换液。
问：复苏后HepG2细胞漂浮细胞较多怎么处理？
答：排除血清和pH对细胞贴壁的影响后，若复苏后有大量漂浮细胞，可使用台盼蓝检查细胞活性。若大部分是活细胞，可以将这些细胞离心收集后重新接种至原瓶。此外，增加血清量（总比例不超过20%）可以促进细胞贴壁。
问：HepG2细胞中出现圆形细胞粘附在贴壁的单层细胞上，如何处理？
答：这是HepG2培养过程中常见的现象，这些细胞可能是尚未完全贴壁或正处于分裂期，无需特殊处理。
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