ARPE-19细胞（人视网膜上皮细胞）

ARPE-19人视网膜上皮细胞是一种源自19岁健康男性的视网膜色素上皮（RPE）细胞系，该男性因车祸致命性头部创伤去世。ARPE19细胞系由Amy Aotaki-Keen于1986年建立，通过选择性胰蛋白酶处理，从眼组织的前几代细胞中去除表面细胞，最终在第5代时获得快速生长的RPE细胞，ARPE19细胞在培养数月后呈现鹅卵石样单层并着色。

ARPE-19细胞在低血清培养条件下，当种植于层粘连蛋白涂层的Transwell COL膜上时，表现出明显的形态学极化，并在培养4周后形成紧密连接，跨上皮电阻达到50至100欧姆/平方厘米的最大值。

ARPE-19细胞特性特征

• 抗原表达：RPE特异性标记CRALBP和RPE-65

• 基因表达：RPE特异性标记CRALBP；RPE特异性标记物RPE-65

• 倍体状态: ARPE-19细胞为二倍体，能够在传代中保持稳定，通常可传代30代以上。在ATCC的鉴定过程中，ARPE19细胞后代可进一步传代48次。
  

• 培养条件: ARPE-19细胞系Dulbecco改良的Eagles培养基和Ham的F12培养基与HEPES缓冲液的1:1混合物中建立，HEPES缓冲溶液含有20%胎牛血清、56 mM终浓度碳酸氢钠和2 mM L-谷氨酰胺，并在37℃的10%CO2中孵育。

• 科研用途: ARPE-19细胞广泛应用于眼科研究、药物筛选、细胞生物学和3D细胞培养等领域。由于其稳定性和易于培养的特性，ARPE-19细胞也被视为理想的转染宿主
  

ARPE-19细胞参数表

ARPE-19人视网膜上皮细胞培养教程

培养基成分与条件汇总

• 基础培养基: DMEM/F-12与Ham's F12培养基的1:1混合物。

• 胎牛血清: 10% FBS。

• 缓冲液: HEPES缓冲液，含20% FBS、56 mM碳酸氢钠和2 mM L-谷氨酰胺。

ARPE19细胞复苏步骤

• 从液氮中取出冻存的ARPE19细胞管，并迅速放入37℃水浴中，轻轻摇动直至细胞完全解冻。

• 解冻后，将ARPE19细胞立即转移到含有10ml完全培养基的离心管中。

• 以1000rpm的速度离心3-5分钟，弃去上清。

• 向ARPE19细胞沉淀中加入适量的新鲜完全培养基，轻轻重悬细胞。

• 将ARPE19细胞转移至预先准备好的培养瓶中，并放入37℃培养箱中进行培养。

ARPE19细胞传代方法

• 换液频率: 每2-3天更换一次培养基，以确保ARPE19细胞的营养供应。

• 传代比例: 传代时可根据ARPE19细胞的生长状态和密度选择1:2至1:4的比例。

• 吸除培养瓶中的旧培养基。

• 加入3-4ml常温PBS，轻轻摇晃培养瓶，润洗ARPE19细胞层10-20秒，随后吸去PBS。

• 加入1ml胰蛋白酶，轻轻晃动培养瓶，使胰酶均匀覆盖ARPE19细胞表面。

• 将培养瓶放入37℃培养箱中，观察ARPE19细胞消化过程。当细胞间隙增大但未完全脱落时，迅速加入2-3ml完全培养基终止消化。

• 用移液器轻轻混匀ARPE19细胞，随后以900rpm离心3-5分钟，弃去上清。

• 加入新鲜的完全培养基重悬ARPE19细胞，将细胞均匀分配至新的培养瓶中。

• 补足完全培养基后，将培养瓶放入培养箱中继续培养。

ARPE19细胞冻存步骤

• 当ARPE19细胞达到适宜密度时，进行传代并准备冻存。

• 将ARPE19细胞重悬于冻存液中（含60%培养基、30%胎牛血清和10%二甲基亚砜（DMSO））。

• 将重悬后的ARPE19细胞分装至冻存管中，并逐渐降温（可使用程序降温器）。

• 最后将冻存管移至液氮中长期保存。

注意事项

• 胰蛋白酶的品牌不同，其消化时间也会有所差异，需根据经验控制消化时间，避免ARPE19细胞过度消化造成损伤。

• 传代时，需轻柔吹打以避免ARPE19细胞损伤，并确保细胞均匀分布。

• 定期检查ARPE19细胞形态及生长状态，确保细胞健康。