原代大鼠视网膜微血管内皮细胞

大鼠视网膜微血管内皮细胞来源于成年大鼠视网膜组织，经过分离培养获得，具有高纯度，不含有多种病原体。视网膜是由血管腔面单层扁平上皮样细胞组成，其产生的生物活性物质对维持血管张力、调节血压、抗血栓形成等具有重要作用。

视网膜及微血管内皮细胞特性

• 视网膜是眼球壁内层的透明薄膜，视网膜分为色素上皮层和感觉层，色素上皮层与脉络膜相连，支持和营养光感受器细胞。

• 视网膜组织学上分为10层，包括色素上皮层、视锥、视杆细胞层、外界膜、外颗粒层、外丛状层、内颗粒层、内丛状层、神经节细胞层、神经纤维层和内界膜。

• 视网膜内层有感光作用。视网膜上的感觉层由三个神经元组成，分别是视细胞层、双节细胞层和节细胞层。

• 视网膜是血管腔面单层扁平上皮样细胞的组成，其产生的生物活性物质对维持血管张力、调节血压、抗血栓形成等起重要作用。

• 视网膜血管内皮细胞在视网膜血管疾病的发病机制中具有重要的病理生理学意义。

大鼠视网膜微血管内皮细胞参数表

大鼠视网膜微血管内皮细胞培养

细胞稳定

• 取出25cm²培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中静置6-8小时或过夜，以稳定细胞状态。

细胞传代

• 吸出25cm²培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次。

• 添加0.125%胰蛋白酶消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3分钟左右，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入完全培养液终止消化。

• 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3的比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，放入37℃、5%CO₂细胞培养箱中培养。

• 待细胞完全贴壁后，培养观察，之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

贴壁细胞消化

• 吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次。

• 添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶以覆盖整个瓶底后，吸出多余消化液，37℃温浴1-3分钟。显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5mL完全培养基终止消化。

• 用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养。

• 待细胞完全贴壁后，培养观察，之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。

细胞收货脱落

• 收集所有细胞悬液，1000rpm离心5分钟，保留沉淀。

• 添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3分钟（或4℃冰箱静置5-7分钟）。消化完后向离心管内加入5mL完全培养基终止消化。

• 经1000rpm离心5分钟，丢弃上清，用5mL完全培养基（补加1%FBS，促进贴壁）重悬沉淀，接种于新的培养瓶内。

• 待细胞完全贴壁后，培养观察，之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基（37℃预热）。

细胞实验

• 原代细胞贴壁特殊，消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免因贴壁不良影响实验。包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm²）、多聚赖氨酸PLL（0.1mg/mL）、明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。

注意事项

• 培养基在4℃条件下可保存3-6个月。

• 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。

• 传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。