人视网膜微血管内皮细胞（HRCEC细胞、原代细胞）

人视网膜微血管内皮细胞（HRCEC）来源于人眼视网膜组织的，广泛应用于研究视网膜血管性疾病。HRCEC细胞用于研究糖尿病性视网膜病变、年龄相关性黄斑变性等视网膜疾病。

HRCEC人视网膜微血管内皮细胞特性

• 来源于正常眼组织，细胞纯度高，稳定性强。

• 细胞纯度高于90%。

• 免疫荧光染色鉴定显示，细胞阳性表达血小板-内皮细胞粘附分子（PECAM-1/CD31）和血管假性血友病因子（vWF）。

• hrcec细胞生长呈鹅卵石状，贴壁培养。

• 在体外培养条件下，HRCEC具有较好的增殖能力，每周可传代2-3次。

• HRCEC可作为体外模型。

HRCEC人视网膜微血管内皮细胞参数表

人视网膜微血管内皮细胞（HRCEC）培养教程

培养准备

• 培养基配置： 基础培养基 500mL，生长添加剂 5mL，胎牛血清 25mL，双抗 5mL。

• 存储条件： 内皮细胞基础培养基：4℃、避光；内皮细胞培养添加剂：-20℃、避光；胎牛血清（FBS）

细胞复苏

1.1 离心法

• 准备一个 T25 的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，一支 15ml 离心管，离心管中加入 4-5ml 细胞完全培养基。

• 取出hrcec细胞冻存管，在 37 度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安全柜。

• 将细胞悬液转移到加有培养基的离心管中，进行 1000 转离心 5 分钟。

• 倒掉上清，加入培养基轻轻重悬细胞，亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。

• 将重悬好的细胞转移到 T25 细胞培养瓶，补充培养基到 8ml 左右，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱培养。

1.2 不离心法

• 准备一个 T25 的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，培养瓶中加入 8ml 左右培养基。

• 取出细胞冻存管，在 37 度水浴中快速解冻，将管子擦干并消毒后迅速拿回生物安全柜。

• 将细胞悬液转移到加有培养基的培养瓶中，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱培养，接种 16 小时后更换培养基。

2. 细胞传代

• 准备细胞完全培养基、细胞培养瓶、胰酶（0.25% Trypsin-0.53mM EDTA）、DPBS。

• 弃去上清，并加入 2-3ml DPBS 轻柔冲洗培养瓶内细胞 1-2 次。

• 加入 1ml 胰酶，室温或者 37 度消化，直到细胞成片脱落，加入 3-4ml 完全培养基终止消化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。

• 收集细胞悬液，进行 1000 转离心 5 分钟，弃去上清，加入培养基轻轻重悬细胞，亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。

• 将重悬好的细胞按比例分装至 T25 细胞培养瓶，补充培养基到 8ml 左右，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱培养。

3. 细胞冻存

• 准备细胞冻存液、细胞冻存管、胰酶（0.25% Trypsin-0.53mM EDTA）、DPBS。

• 弃去上清，并加入 2-3ml DPBS 轻柔冲洗培养瓶内细胞 1-2 次。

• 加入 1ml 胰酶，室温或者 37 度消化，直到细胞成片脱落，加入完全培养基终止消化，如果有成团块脱落的细胞可轻轻吹打分散细胞后再终止消化。

• 收集细胞悬液，进行 1000 转离心 5 分钟，弃去上清。

• 加入冻存液，重悬细胞，并分装到冻存管，冻存密度 0.8-1.5×106 细胞/ml。

• 将冻存管放入程序降温盒，并放到-80℃冰箱，过夜后将冻存管转移到液氮保存。