RGC-5小鼠视网膜神经节细胞株

RGC-5小鼠视网膜神经节细胞最初被认为来源于大鼠，但后续研究表明其实际来源于小鼠（PubMed=19443730；PubMed=24664692）。虽然有人认为RGC-5可能与661W细胞相同（PubMed=23975727；PubMed=24021353），但这一观点受到661W细胞系发起者的部分反对（PubMed=24472671）。

RGC-5细胞株最早是从小鼠视网膜神经节细胞中分离并通过永生化技术建立，具有上皮样细胞形态并呈贴壁生长。尽管最初认为其来源于视网膜神经节细胞，后续研究发现其缺乏某些视网膜神经节细胞特有的标记物。对RGC-5细胞的线粒体DNA和Thy-1基因分析表明其DNA序列与小鼠相符，而非大鼠，这确认了其小鼠来源。

RGC-5细胞系在传代过程中可能已完全转变为661W细胞（PubMed=23975727；PubMed=24021353），这一结论基于多项检测，包括免疫印迹和免疫组化实验，显示RGC-5细胞与661W细胞在多个方面相似，如共同表达SV40病毒的大T抗原。

RGC-5小鼠视网膜神经节细胞株特性

• 可能与661W细胞系存在交叉污染或高度相似

• 含有小鼠的线粒体DNA和Thy-1基因序列
  

• 表达SV40病毒的大T抗原，这是661W细胞的特征，而非原始RGC-5细胞应有的特征

• 表达特征：缺乏视网膜神经节细胞特有的标记物、可能表达光受体细胞的特征，因为661W是一种光受体细胞系

• 功能特征：对谷氨酸的敏感性发生变化，表现出高生存率（约95%），与最初报道的35-50%生存率不符

• 基因特征：DNA分型结果显示与661W细胞高度相似、G-显带核型分析结果与661W细胞一致

• 其他特征：可能在传代过程中发生了转变，从早期的视网膜神经节细胞特性转变为更接近661W细胞的特性

RGC-5小鼠视网膜神经节细胞株参数表

RGC-5小鼠视网膜神经节细胞株培养教程

RGC-5细胞复苏步骤

• 解冻：将冻存的RGC-5细胞从液氮中取出，迅速置于37°C水浴中解冻，轻轻摇晃至完全融化（约1-2分钟）。

• 离心：将解冻后的RGC-5细胞悬液转移到15ml离心管中，加入10ml预温的完全培养基，1000rpm离心5分钟。

• 重悬：弃去上清，用2ml完全培养基重悬RGC-5细胞。

• 接种：将重悬后的RGC-5细胞转移到预先准备好的培养瓶中，加入适量完全培养基，轻轻摇匀。

• 培养：将培养瓶置于37°C，5% CO₂培养箱中培养RGC-5细胞。

RGC-5细胞传代步骤

• 观察：当RGC-5细胞汇合度达到80%-90%时，准备进行传代。

• 洗涤：弃去旧培养基，用PBS缓冲液轻轻洗涤RGC-5细胞一次。

• 消化：加入适量0.25%胰酶-EDTA溶液，37°C孵育1-2分钟，观察RGC-5细胞开始圆缩、脱落。

• 终止：加入2-3倍体积的完全培养基终止消化。

• 离心：将RGC-5细胞悬液转移到离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清。

• 重悬：用适量完全培养基重悬RGC-5细胞，根据需要进行细胞计数。

• 接种：将RGC-5细胞按适当比例接种到新的培养瓶中，加入完全培养基，轻轻摇匀。

• 培养：将培养瓶置于37°C，5% CO₂培养箱中继续培养RGC-5细胞。

RGC-5细胞冻存步骤

• 收集细胞：按照传代步骤消化并收集RGC-5细胞。

• 离心：1000rpm离心5分钟，弃去上清。

• 重悬：用冻存液重悬RGC-5细胞，细胞密度调整为1×10⁶ cells/ml。

• 分装：将RGC-5细胞悬液分装到冻存管中，每管1ml。

• 程序降温：将冻存管置于程序降温盒中，-1°C/min降温至-80°C，24小时后转移至液氮中长期保存RGC-5细胞。

注意事项

• 无菌操作：所有操作应在无菌条件下进行，使用无菌器具和试剂，以确保RGC-5细胞的健康。

• 细胞观察：定期观察RGC-5细胞形态和生长状态，及时更换培养基，避免RGC-5细胞过度汇合。

• 细胞状态：确保RGC-5细胞状态良好，避免细胞污染和交叉污染。