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Hep G2细胞培养常见问题
Hep G2细胞的数量如何计数？
因为细胞大小因时间和具体培养物之间的差异而不同，所以融合培养容器中的细胞数量各不相同。不同的培养条件或不同的培养时间会影响细胞大小。此外，Hep G2细胞有相互堆叠的生长趋势，这增加了细胞计数的范围。因此，含有80-90%融合度的单个T-75培养瓶大概含有1.2×105至2.8×105个活细胞/cm2。
Hep G2[HEPG2]细胞的生长特性和形态是什么？
培养基：Hep G2[HEPG2]细胞培养使用含有10%胎牛血清（FBS）的Eagle's Minimum Essential Medium（EMEM）培养基。
Hep G2细胞具有上皮样形态，最初附着在细胞的小块中，许多簇仍处于悬浮状态。几天后，细胞从贴壁的细胞集落向外延伸生长。细胞会堆积在粘附的集落上，形成多层外观形状，这种情况比较常见。Hep G2是一种贴壁细胞系。然而，一些细胞培养物比其他细胞培养物需要更长的时间才能附着。在从冷冻保存中恢复的第一周，Hep G2培养物中如有漂浮细胞是正常的。如果存在大量漂浮物，特别是在生长的第一周，请在前3天不要进行如何操作。如果仍然有很多漂浮物，用台盼蓝检查细胞存活情况。不要丢弃漂浮的细胞，当每2或3天更换新鲜培养基时，应通过温和离心（125xg；离心5-10分钟）将其保留并添加回粘附群体。分离或丢弃活的漂浮细胞会使培养物过于稀释，生长会滞后（或停止）。
缓慢的贴壁和生长有时可以通过将血清浓度提高到15-20%来改善。
培养条件的细微变化，特别是生长培养基中使用的血清的pH和质量，可能会影响细胞表现出的结块量。细胞也趋向于液泡状，尤其是在汇合处。完整的生长培养基应补充高质量、低内毒素、未经热灭活的胎牛血清。使用这种血清，可以帮助圆形细胞簇更好地粘附并压平为单层。
为什么Hep G2[HEPG2]细胞在用胰蛋白酶传代培养后形成团块而不贴壁？
如果胰蛋白酶消化后胰蛋白酶没有被中和，可能会导致细胞结块而无法贴壁。使用胰蛋白酶消化（胰蛋白酶-EDTA溶液）后，用完整的生长培养基完全中和胰蛋白酶-EDTA，轻轻离心，然后将细胞重置于新鲜培养基中。
培养条件的细微变化，特别是生长培养基中使用的血清的pH和质量，也可能影响细胞表现出的结块量。
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