细胞房污染和生物安全

培养细胞的污染可能来自许多来源,包括其他细胞系、试剂、移液管和培养容器等耗材、组织培养罩和培养箱等设备以及实验室人员。虽然污染的可能性始终存在,但可以通过采取适当的预防措施来降低或消除风险:仅使用已知质量和无菌性的试剂、隔离新细胞系直至其经测试无污染、对所有设备进行日常维护和清洁以及对细胞培养人员进行适当的培训。
检查微生物污染
大多数细菌污染通常在几天内发生,通常肉眼可见。培养基会有明显变化,如浑浊度、悬浮液中可见颗粒以及 pH 值快速下降(黄色,表示酸性)都是细菌污染的指标。生长非常缓慢的罕见细菌种类可能难以检测。
真菌污染物可能会或可能不会导致培养基 pH 值发生变化,可通过检查悬浮液中是否存在丝状结构来将其与细菌区分开来。酵母细胞比细菌大,但可能不会明显改变培养基的 pH 值,并且会以单独的圆形或卵形颗粒的形式出现。可用于检测细菌和真菌污染的微生物培养基包括血琼脂、硫代乙醇酸盐液体培养基、胰蛋白酶大豆液体培养基、BHI液体培养基、萨布罗液体培养基、YM 液体培养基和含有 2% 酵母提取物的营养液体培养基。但是有些微生物污染并不明显。例如,使用抗生素可以抑制细菌生长,从而消除污染。一些病毒感染不会改变细胞的形态,而检测支原体污染则需要特定的检测方法。
支原体污染
通过直接(琼脂糖和液体培养基培养)和间接(Hoechst)方法筛选细胞系中的支原体污染。例如荧光染料 Hoechst DNA 染色剂将与支原体的 DNA 结合,使用配备适当荧光光学器件的显微镜检查时可以轻松检测到生物体。直接培养法需要液体培养基和琼脂,这将允许分离可培养菌株,这可以通过琼脂培养基上特征性支原体菌落的出现来证明。
大多数细胞培养实验室已将基于 PCR 的支原体检测纳入其常规细胞培养操作中,可以使用 通用支原体检测试剂盒等试剂盒来检测。
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