WRL68细胞（人正常肝细胞）

WRL-68细胞系源自一位30岁6个月的女性的健康肝脏组织。WRL68细胞具备典型的上皮细胞形态，能够依附于培养基表面生长。WRL-68细胞表现出与肝脏原代细胞和肝细胞相似的形态学特征。WRL68细胞曾受到支原体污染，但已通过ECACC的处理完全清除。此外，基于STR PCR DNA分析，WRL-68细胞与HeLa细胞在遗传学上无法区分，因此被认定为来源于HeLa细胞。
尽管如此，WRL68细胞仍然广泛应用于肝脏生物学、肝脏疾病模型、药物代谢研究及生物技术等领域，因其提供了研究正常肝细胞功能的一个有价值的模型。

WRL68细胞特性特征

• 分泌功能：WRL-68细胞能够分泌重要的肝脏蛋白，如白蛋白和α-胎蛋白。
  

• 酶表达：肝脏特异性酶：表达丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、γ-谷氨酰转肽酶（GGT）和碱性磷酸酶（ALP）。

• 同工酶：G6PD，A

• 污染历史：WRL-68曾被支原体污染，但经过ECACC的治疗和治愈，现已确认无污染。

• WRL-68细胞广泛应用于以下领域：药物代谢研究、肝脏疾病模型、生物技术研究。

WRL68细胞参数表

WRL68人正常肝细胞培养教程

收货处理

• 收到WRL68细胞培养瓶或冻存管后，首先检查包装是否完好，培养液是否有泄漏或浑浊。
  

• 对于冻存的WRL68细胞，检查干冰是否挥发完全，并确保冻存管没有损坏。

• 使用75%酒精擦拭外部进行消毒处理。

• 若收到的是培养瓶形式的WRL68细胞，将T-25培养瓶放入37℃、5% CO₂培养箱中静置2-4小时，帮助细胞恢复状态。

WRL68细胞复苏

• 采用含10%胎牛血清（FBS）和1%抗生素（如青霉素/链霉素）的DMEM或MEM培养基，作为WRL68细胞的完全培养基。
  

• 从液氮或-80℃冰箱中取出冻存的WRL68细胞，快速放入37℃水浴中融化（约1分钟），过程中轻轻摇动冻存管。
  

• 将融化的WRL68细胞加入5 mL已预热的完全培养基中，并转移至15 mL离心管中。

• 以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。

• 使用2 mL完全培养基重悬WRL68细胞，并将其转移至T-25培养瓶中。

• 将培养瓶置于37℃、5% CO₂的培养箱中，过夜培养以便WRL68细胞贴壁生长。

WRL68细胞传代

• 当WRL68细胞达到80%-90%汇合时，需进行传代操作，以保持细胞活力和正常生长状态。
  

• 吸弃培养瓶中的旧培养基，用1 mL无菌PBS轻轻润洗WRL68细胞一次，去除残留血清。
  

• 加入1 mL 0.25%胰酶（Trypsin-EDTA）溶液，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察WRL68细胞是否开始变圆并脱落。

• 迅速加入1 mL完全培养基中和胰酶，将细胞悬液收集到15 mL离心管中。

• 以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液，并用新鲜的完全培养基重悬WRL68细胞。

• 按所需比例将WRL68细胞分至新的培养瓶中，继续在37℃、5% CO₂条件下培养。

WRL68细胞冻存

• 按照传代步骤收集WRL68细胞，并进行细胞计数，调整至5 x 10^6至1 x 10^7个/mL的细胞密度。
  

• 用预冷的冻存液（90%完全培养基 + 10%二甲基亚砜DMSO）重悬WRL68细胞。

• 将每管装1 mLWRL68细胞悬液，做好标识。

• 将冻存管放置于-80℃冰箱中冷冻过夜，随后转移至液氮中进行长期保存。

注意事项

• 运输中的培养基不可继续用于WRL68细胞培养，需使用新鲜配制的完全培养基。
  

• 运输过程中的温度变化可能导致部分WRL68细胞死亡，这是正常现象，需及时检测细胞状态。

• 在操作WRL68细胞时，需严格遵守无菌技术，以避免污染的发生。
  

• 定期观察WRL68细胞的生长状态，确保其生长良好，无异常形态或污染。