AML12细胞系（小鼠正常肝细胞系）

AML12细胞系源自3个月龄的CD1-MT42转基因小鼠（品系），这些小鼠的肝脏细胞被转染了人源TGF-α基因。AML12细胞系由小鼠肝脏正常细胞建立，专为研究TGF-α的作用而开发。

AML12细胞系特性特征

• 分子特征：aml12细胞仅含有乳酸脱氢酶的同工酶5、保留了典型的肝细胞超微结构

• AML12细胞保留了表达血清（白蛋白、α1抗胰蛋白酶和转铁蛋白）和缝隙连接（连接蛋白26和32）蛋白高水平mRNA的能力

• 表达高水平的人TGF-α和较低水平的小鼠TGF-α

• 基因特征：表达白蛋白基因、表达人TGF-α和小鼠TGF-α基因

• 在体外培养过程中，AML12细胞的肝脏特异性蛋白表达会逐渐降低。然而，通过使用无血清培养基可以有效地重新激活这些特定蛋白的表达

• aml12细胞不会形成菌落或在软琼脂中生长

• 不致瘤性：aml12细胞在免疫抑制的小鼠中没有致瘤性、倍增时间约37小时

• aml12细胞对培养条件有特殊要求,如需要添加胰岛素、转铁蛋白、硒和地塞米松等
  

AML12细胞系参数表

AML12小鼠正常肝细胞系培养教程

AML12细胞复苏步骤

• 准备预热至37°C的完全培养基。

• 从液氮或-80°C冰箱中取出AML12细胞冻存管，并在37°C水浴中快速解冻（约1分钟）。

• 将解冻的AML12细胞悬液转移到含5 ml预热培养基的15 ml离心管中。

• 以1000 rpm离心5分钟。

• 弃去上清，用2 ml完全培养基轻轻重悬AML12细胞沉淀。

• 将细胞悬液转移到T25培养瓶中，加入3-5 ml完全培养基。

• 将培养瓶置于37°C、5% CO2培养箱中培养。

AML12细胞传代

• 当AML12细胞密度达到70%-80%时进行传代。

• 弃去旧培养基，用PBS轻轻清洗AML12细胞1-2次。

• 加入适量胰酶-EDTA溶液，在37°C下消化2-3分钟。

• 显微镜下观察AML12细胞脱落情况，轻拍培养瓶以促进脱落。

• 加入含血清的培养基终止消化。

• 收集细胞悬液，1000 rpm离心5分钟。

• 弃去上清，用新鲜完全培养基重悬AML12细胞。

• 按1:2-1:4的比例将AML12细胞接种到新的培养瓶中。

AML12细胞换液频率

• 每2-3天更换一次培养基。

AML12细胞培养注意事项

• 首次传代比例：建议使用1:2的接种比例，之后可根据AML12细胞的生长情况调整为1:2-1:4。

• 细胞观察：定期观察AML12细胞的形态和生长状况，及时发现异常。

• 培养条件：严格控制培养条件，避免培养基污染。确保培养基的pH值保持在7.2-7.4之间。

• 传代频率：避免传代时间过长，以免影响AML12细胞的活性。定期进行细胞鉴定，确保细胞特性未发生改变。

• 培养箱使用：减少频繁开关培养箱，保持温度和CO2浓度的稳定。

• 离心注意：使用低速或低通量离心，避免对AML12细胞造成机械损伤。

AML12细胞冻存

• 冻存液配方：90%胎牛血清 + 10% DMSO

• 细胞密度：>1x10^6 cells/ml

• 冻存方法：缓慢降温后将AML12细胞转入液氮中进行长期保存。

培养基配方及其作用

• DMEM/F12基础培养基（88%）：提供细胞生长所需的基本营养物质、无机盐和缓冲系统，支持细胞的基本代谢和增殖。

• 优质胎牛血清（FBS，10%）：提供生长因子、激素和其他蛋白质，促进细胞的生长和增殖。

• ITS（胰岛素+转铁蛋白+硒，1%）：

• 胰岛素：促进葡萄糖和氨基酸的吸收，有助于细胞生长。

• 转铁蛋白：运输铁离子，参与细胞代谢。

• 硒：作为抗氧化剂，保护细胞免受氧化损伤。

• 地塞米松（Dexamethasone，40 ng/ml）：维持肝细胞特异性功能，促进肝脏特异性基因的表达。

• 青霉素-链霉素（P/S，1%）：抑制细菌生长，防止培养基污染。