
H22细胞(小鼠肝癌细胞)
- 来源:肝癌;腹水
- 细胞特征:悬浮细胞, 淋巴母细胞样
- 培养基:RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
- 其他:通过C3HA小鼠诱发肝癌获得,后在昆明种小鼠中转化为腹水瘤
H22细胞系最早由前苏联医学科学院肿瘤研究所于1952年通过在C3HA小鼠中诱导肝癌形成实体瘤后建立。随后,该瘤细胞悬液经过皮下移植至昆明种小鼠,最终转化为腹水瘤。这些细胞经过多次传代后,能够在多种小鼠品系中(如Km小鼠、615小鼠、C57BL/6小鼠和BALB/C小鼠)形成实体瘤和腹水瘤。后来,H22细胞系由大连医科大学从小鼠腹水中进一步分离并推广。
H22细胞(小鼠肝癌细胞)参数表
细胞名称 | H22细胞(小鼠肝癌细胞) |
别称 | Hepatoma-22; Hepatoma22; h-22 |
物种 | 小鼠(Mus musculus) |
组织来源 | 肝脏,肝癌 |
细胞形态 | 淋巴母细胞样,呈圆形 |
生长特性 | 悬浮生长 |
来源 | 由前苏联医学科学院肿瘤研究所于1952年建立,通过C3HA小鼠诱发肝癌获得,后在昆明种小鼠中转化为腹水瘤 |
培养基 | RPMI-1640 + 10% 胎牛血清 (FBS) + 1% 青霉素-链霉素 |
接种密度 | 3×10^5 - 5×10^5 cells/mL |
换液频率 | 每2-3天更换一次培养基 |
培养条件 | 37°C,95% 空气 + 5% CO2 |
冻存液 | 55% 基础培养基 + 40% FBS + 5% DMSO |
生物安全等级 | BSL 1 |
传代次数 | 通常在4-5代内使用,之后细胞活力可能下降 |
表面标志物 | 可能表达CD44、CD24等与肿瘤相关的抗原 |
增殖指数 | 高增殖能力,细胞周期调控与肿瘤发生相关 |
基因组特征 | 可能包含与肝脏代谢、细胞增殖和凋亡相关的基因突变 |
转录组特征 | 可能显示与肝癌相关的特定基因表达上调 |
研究领域 | 肝癌基础研究、药物筛选、肿瘤生物学研究 |
主要用途 | 评估抗肿瘤药物效果、探索生物标志物 |
培养教程
H22小鼠肝癌细胞培养教程
H22细胞复苏步骤
从液氮中取出冻存的H22细胞,迅速置于37°C水浴中,轻轻摇动,直至H22细胞完全解冻(约1-2分钟)。
将解冻的H22细胞悬液转移至10 mL完全培养基的离心管中,轻轻混匀。
以1000 rpm离心5分钟,弃去上清液。
将H22细胞重悬于5 mL完全培养基中,混匀后接种至培养瓶中,接种密度为3×10^5 - 5×10^5 cells/mL。
H22细胞的换液与传代
换液频率:每2-3天更换一次培养基,以保持H22细胞的最佳生长环境。
当H22细胞生长至70%-80%汇合时,开始传代。
用PBS轻柔洗涤H22细胞,去除残留培养基。
加入1-2 mL胰酶,消化H22细胞,持续观察H22细胞脱落情况,通常需要1-2分钟。
加入等体积的完全培养基终止消化,轻轻吹打混匀。
以1000 rpm离心5分钟,弃去上清液。
将H22细胞重悬于适量的完全培养基中,并以接种密度为3×10^5 - 5×10^5 cells/mL接种至新的培养瓶中。
H22细胞冻存步骤
选取对数生长期的H22细胞,收集后离心去除培养基。
用55%基础培养基、40% FBS和5% DMSO的冻存液重悬H22细胞。
将H22细胞分装入冻存管中,逐步冷冻:先置于-80°C冰箱过夜,次日转移至液氮中长期保存。
注意事项
悬浮细胞处理:H22细胞为悬浮生长,收集时应注意保留所有培养液,以免损失H22细胞。
传代次数控制:H22细胞在体外传代4-5代后可能活力下降,可通过腹水培养恢复其活力。
无菌操作:整个操作过程应严格无菌,以避免污染。
H22细胞的收集和离心方法
设备无菌:确保所有离心管、培养基和其他操作工具均为无菌状态。
H22细胞收集:将培养瓶中的H22细胞悬液轻轻混匀,确保H22细胞均匀分布。
离心操作:将H22细胞悬液转移至无菌离心管,1000 rpm离心8-10分钟。
去除上清液:小心去除上清液,保留H22细胞沉淀。
重悬H22细胞:加入适量完全培养基,轻轻吹打混匀,进行接种或冻存。
通过腹水培养恢复H22细胞活力
实验小鼠准备:选择健康的昆明种小鼠进行实验。
腹水诱导:将H22细胞悬液注射至小鼠腹腔中,通常注射量为1×10^6 cells/mL。
腹水收集:注射后3-7天,通过腹腔穿刺收集腹水液体。
H22细胞分离:收集的腹水液体离心1000 rpm,5-10分钟,去除上清液,保留H22细胞沉淀。
重悬和培养H22细胞:用完全培养基重悬H22细胞,并接种至新的培养瓶中继续培养。
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