收到细胞培养物后的处理方法

大多数细胞以培养容器的形式运输。在这些容器中接种细胞，进行培养以确保细胞生长。

收到培养瓶后，目视检查培养基是否有微生物污染，这包括异常的 pH 值变化（酚红导致的黄色或紫色）、浑浊度或颗粒。使用低倍倒置显微镜（100 倍）检查培养基是否有微生物污染的证据以及细胞的形态。查看有关检查细胞培养物的更多详细信息。

如果细胞贴壁并在单层中生长：

用无菌方法去除所有培养基，只留下 5 mL 至 10 mL。培养基可以保存以供重复使用，并应储存在 4°C 下。

将培养瓶按照产品说明书推荐的温度和 CO 2浓度进行培养（对于大多数细胞系，培养温度为 37°C，CO 2浓度为 5% ），直至细胞进行传代培养。

如果细胞未贴壁或悬浮生长：

• 将烧瓶中的所有培养物无菌转移到离心管中。

• 以 125 × g 的速度离心 5 至 10 分钟。

• 除去 10 mL 的培养基上清液，重新悬浮细胞。将剩余的培养基储存在 4°C 下以备后用。

• 根据细胞系，将重悬的细胞无菌转移至 25 cm2烧瓶或 75 cm2烧瓶中。

• 在产品信息表上推荐的温度和 CO 2浓度下培养细胞，直至细胞传代培养。

大多数细胞系都是从一片切碎或酶分散的组织中衍生的原代培养物开始的。原代培养物是几种细胞类型的混合物，保留了其来源组织的特征。

一段时间后，原代培养的细胞将达到汇合状态，即由于细胞扩增，培养容器的所有可用空间都处于被覆盖的状态。此时，需要将培养物分解（通常使用胰蛋白酶等蛋白水解酶）成单个细胞并进行传代培养（分裂、传代或转移）。在第一次传代之后，培养物通常被称为细胞系。随着每次后续传代培养，细胞群变得更加均质，因为生长较快的细胞占主导地位。也可以通过克隆从培养物中选出具有所需特性的细胞。

二倍体细胞系很少能超过几次群体倍增。它们的复制能力有限，在 20 到 80 次群体倍增后开始减慢并最终停止分裂。1最近的证据表明，在细胞培养中观察到的一些细胞衰老可能是由于培养条件不适当，而不是预定的复制性衰老。2还有一些数据支持某些物种（尤其是人类）的细胞即使在改善的培养条件下生长也会出现复制性衰老。这种衰老是由每次细胞分裂时染色体末端（端粒）的缩短引起的。

相反，连续（或永生化）细胞系具有无限的复制能力。这些细胞系是通过多种方式中的一种永生化或转化而来的。许多连续细胞系来自肿瘤组织。大多数细胞系都是连续的，但少数细胞系，如 CCD-1117Sk 人皮肤成纤维细胞 或 CCD-18Co 人结肠细胞是有限的。

如培养容器部分所述，细胞系要么贴壁在表面（锚定依赖性），要么悬浮生长（锚定不依赖性）。当细胞在单层或悬浮状态下生长和分裂时，它们通常遵循由四个阶段组成的特征生长模式：滞后、对数或指数、稳定或稳定和衰退。

• 滞后阶段——在培养容器中接种后，细胞会立即缓慢生长，同时从传代培养的压力中恢复过来。

• 对数期或指数期——细胞进入指数生长期，持续至整个生长表面被占据或细胞浓度超过培养基的容量。

• 稳定期——细胞增殖减慢直至停止。

• 衰退期——如果不更换培养基且细胞数量没有减少，细胞就会失去活力，数量也会减少。

为了确保细胞活力、遗传稳定性和表型稳定性，需要将细胞系保持在指数期。这意味着在细胞进入稳定生长期之前、单层细胞 100% 汇合之前或悬浮液达到其最大推荐细胞密度之前，需要定期对其进行传代培养。为每个细胞系生成生长曲线有助于确定细胞系的生长特性。