细胞培养检查要点

定期仔细观察细胞培养物的形态和活力。检查培养瓶中的培养基是否有微生物污染。这包括异常的 pH 值变化(酚红导致的黄色或紫色)、浑浊度或颗粒。此外,还要寻找漂浮在培养基-空气界面上的小真菌菌落。特别检查容器边缘,因为这些污染可能不容易通过显微镜看到。
使用低倍倒置显微镜(40 倍)检查培养基中是否有微生物污染后以及细胞的形态。细菌污染会出现细胞间隙内闪烁的小黑点。酵母污染会以圆形或发芽的颗粒形式出现,而真菌则会发现有细丝状菌丝。对于在烧瓶中生长的非粘附细胞(例如杂交瘤),只需在显微镜上直接观察烧瓶即可。对于在旋转烧瓶或生物反应器中生长的细胞,需要取出细胞悬浮液样本并装入显微镜载玻片或血细胞计数器中进行观察。
大多数贴壁细胞应牢固地附着在培养瓶表面。在某些情况下,健康细胞会在有丝分裂期间变圆并脱落,并且看起来非常有折射性。有丝分裂后,它们会重新贴壁。如果培养容器受到物理干扰,其中一些细胞会自由漂浮。相反,死细胞通常会变圆并从单层细胞上脱落,看起来比健康细胞更小、更暗(不具折射性)。
悬浮培养中的细胞可以以单细胞或细胞簇的形式生长。活细胞呈圆形且有折射性,而死细胞则较小且较暗。有时,一部分细胞会附着在培养容器的侧面并生长,呈圆形或扁平状。贴壁细胞的细胞密度随培养条件而变化。在健康细胞群中也可能观察到细胞碎片。还有一些细胞系以半贴半悬的形式生长。
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