NP69细胞（人永生化鼻咽上皮细胞）

NP69细胞系是从男性鼻咽部组织中分离出的原代鼻咽上皮细胞，通过转染携带SV40大T抗原的PX8质粒而获得的永生化细胞。NP69细胞保留了许多正常鼻咽上皮细胞的生物学特性，如角蛋白表达谱和对TGF-β的响应，同时也呈现出在鼻咽癌（NPC）中常见的多种遗传特征。

NP69细胞系为非肿瘤性细胞，依赖贴壁生长。在研究与病毒相关的肿瘤发生机制，特别是在东南亚地区高发的鼻咽癌的研究中具有重要应用价值。鼻咽癌的发病与病毒因素密切相关，特别是EB病毒（EBV）和人乳头瘤病毒（HPV）。

NP69细胞SV40永生化鼻咽细胞特性特征

角蛋白谱：NP69细胞保留了正常鼻咽细胞的角蛋白谱。

对TGF-β反应：NP69细胞对转化生长因子β（TGF-β）的反应性与正常鼻咽细胞相似。

遗传特征：NP69细胞具有在鼻咽癌（NPC）中观察到的许多遗传特征，在研究与病毒相关的肿瘤发生机制时具有重要的应用价值。

非致瘤性：NP69细胞被认为是非致瘤性的，适合在实验室中进行安全操作.

NP69细胞参数表

NP69细胞人SV40永生化鼻咽上皮细胞培养教程

NP69细胞复苏

• 将基础培养基与10-20%的FBS和1%的抗生素混合，制备NP69细胞的完全培养基。
  

• 迅速从液氮中取出冻存的NP69细胞，将其立即置于37℃水浴中，快速摇动使其均匀解冻，解冻时间控制在1分钟以内。
  

• 将解冻后的NP69细胞转移到15ml离心管中，加入5ml预热的完全培养基，1000rpm离心5分钟，以去除冻存液中的DMSO。
  

• 小心吸弃上清液，加入2ml预热的完全培养基，轻柔地重悬NP69细胞。
  

• 将重悬的NP69细胞转移至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO₂培养箱中培养。
  

• 24小时后检查NP69细胞的贴壁情况，如果NP69细胞未能贴壁，可能是死细胞，需更换新鲜培养基并再次培养。
  

NP69细胞传代

• 当NP69细胞生长达到80%-90%汇合度时，准备进行传代操作。
  

• 吸弃旧培养基，加入1ml无菌PBS轻轻洗涤NP69细胞，去除残留培养基。
  

• 加入1-2ml预热的胰蛋白酶，37℃下消化2-5分钟，直至NP69细胞变圆并开始脱落。
  

• 加入等量的完全培养基以终止对NP69细胞的消化反应。
  

• 将NP69细胞悬液转移至离心管中，1000rpm离心5分钟，吸弃上清。
  

• 用2-5ml完全培养基重悬NP69细胞，并按1:2至1:4的比例接种至新培养瓶中，继续在37℃、5% CO₂培养箱中培养。
  

NP69细胞冻存

• 按比例配制冻存液，确保DMSO均匀混合，以适应NP69细胞的冻存需求。

• 在传代过程中，收集培养好的NP69细胞，并离心处理以去除培养基。
  

• 用冻存液将NP69细胞重悬，确保每管含有约1×10^6个NP69细胞。
  

• 将NP69细胞悬液分装至冻存管中，标记清楚，先在-80℃冷冻24小时，然后转移至液氮中长期保存。

注意事项

• 培养基使用：使用专用的NP69细胞培养基，以确保NP69细胞获得最适合的生长环境，避免与其他细胞系共用培养基。

• 细胞操作：在NP69细胞传代和复苏过程中，避免强烈的机械搅拌或过度移动，以减少对NP69细胞的损伤。

• 生物安全：所有操作应在二级生物安全柜内进行，确保实验者的安全和NP69细胞的无菌性。

• 在NP69细胞的培养过程中，建议根据实验需求，加入1%的生长因子至培养基中。这些生长因子可以包括：

• 表皮生长因子（EGF）：促进NP69细胞增殖与生长。

• 转化生长因子β（TGF-β）：调控NP69细胞增殖与分化。

• 其他细胞因子：如肝细胞生长因子（HGF）或胰岛素，可根据研究的具体需求进行选择。