
ncih446细胞(人小细胞肺癌细胞)
- 来源:肺;转移灶:肋膜渗出癌;小细胞肺癌
- 细胞特征:半贴半悬 , 上皮细胞样
- 培养基:生长培养基:RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
- 其他:ncih446细胞原始形态并不完全具有典型的小细胞肺癌特征
NCI-H446细胞株是从一位61岁白人男性小细胞肺癌患者的胸腔积液(胸水)中分离得到的人类肿瘤细胞系。
NCI-H446细胞的原始形态并不完全具有典型的小细胞肺癌特征,被认为是小细胞肺癌的生化和形态学变种。
NCI-H446细胞系这是一种超三倍体人类细胞系。模式染色体数目为74,发生率为22%,多倍体为2.5%。大多数细胞共有超过25个标记,包括inv(1)(p32q21)、der(1)t(1:4)(q42;q11)、i(5q)、t(2p13q)和der(19)t(7;HSR;19)(q11;HSR,p13.3)。结构正常的N1和N13缺失,正常的N4、N5和N10大多为每个细胞的单拷贝。每个细胞有两对X/Y。
NCI-H446细胞具有以下特性和特征
分子特征:表达神经元特有的烯醇酶、表达脑型肌酸激酶同工酶、左旋多巴脱羧酶、蚕素、抗利尿激素、催产素和胃泌激素释放肽的表达未达到可检测水平
基因特征:C-myc基因显著扩增:DNA序列扩增约20倍;C-myc RNA表达:比正常细胞增加15倍;
生长特性:半贴壁半悬浮生长、形态类似上皮细胞;
致瘤性:在裸鼠中可形成移植性肿瘤,但肿瘤组织学特征与典型小细胞肺癌不同
生化特性:被认为是小细胞肺癌的生化和形态学变种
培养特性:对培养条件敏感,特别是对温度和CO2浓度的变化;贴壁时间较长,处理后24小时内尽量不要移动
形态特征:原始形态并不完全具有典型的小细胞肺癌特征
转移特性:显示胸腔积液转移性
ncih446细胞参数表
细胞名称 | ncih446细胞(人小细胞肺癌细胞) |
细胞别称 | NCI-H446 ;H446; H-446; NCI-446; NCIH446 |
细胞来源 | 61岁白人男性小细胞肺癌患者的胸腔积液 |
细胞类型 | 人小细胞肺癌细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样,类似淋巴母细胞 |
生长特性 | 半贴壁半悬浮 |
安全等级 | BSL1 |
染色体特征 | 模式染色体数为74(超三倍体);大多数细胞具有多种染色体标记 |
基因特征 | C-myc DNA序列扩增约20倍;C-myc RNA表达比正常细胞增加15倍 |
表达标志物 | 神经元特有的烯醇酶,脑型肌酸激酶同工酶 |
未检测到表达 | 左旋多巴脱羧酶、蚕素、抗利尿激素、催产素、胃泌激素释放肽 |
基础培养基和血清 | RPMI-1640,10% FBS |
培养添加剂 | 10 nM氢化可的松, 0.005 mg/ml胰岛素, 0.01 mg/ml铁传递蛋白, 10 nM 17-beta-雌二醇, 30 nM亚硒酸钠 |
培养环境 | 37°C,5% CO2,pH 7.2-7.4 |
细胞处理 | 换液2~3次/周;传代比例1:3~1:9;贴壁时间较长,处理后24小时内尽量不要移动 |
冻存方法 | 完全培养基+5% DMSO,液氮保存 |
致瘤性和转移性 | 在裸鼠中可形成非典型小细胞肺癌的移植性肿瘤;显示胸腔积液转移性 |
药物敏感性 | 对多种化疗药物敏感,具体敏感性需进行实验验证 |
研究用途 | 小细胞肺癌研究,药物筛选,基因功能研究 |
培养和形态特征 | 对培养条件敏感;原始形态并不完全具有典型的小细胞肺癌特征 |
生化特性 | 被认为是小细胞肺癌的生化和形态学变种 |
同工酶 | AK-1,;ES-D,1;G6PD,B;GLO-I,2;Me-2,0;PGM1,1-2;PGM3,1 |
保藏机构和编号 | ATCC,HTB-171 |
细胞鉴定和检测 | 建议定期进行STR分析确认细胞身份;定期进行支原体检测 |
实验技术 | 可进行转染(需特殊处理);适用于药物筛选;可进行CRISPR/Cas9等基因编辑实验 |
细胞密度和增殖 | 建议保持在2-4 x 10^5 cells/ml;增殖较快,具体增殖率需实验测定 |
研究应用 | 可用于研究细胞凋亡机制、细胞周期调控机制和与小细胞肺癌相关的信号通路 |
培养教程
ncih446人小细胞肺癌细胞培养教程
细胞复苏
从液氮中取出NCI-H446细胞的冻存管,迅速置于37°C水浴中解冻。
解冻后,将NCI-H446细胞悬液转移到预热的完全培养基中。
以1000 rpm离心5分钟,弃上清。
用新鲜完全培养基重悬NCI-H446细胞,转移到T25培养瓶中。
置于37°C、5% CO2培养箱中培养。
细胞传代
当NCI-H446细胞密度达到80%-90%时进行传代。
收集NCI-H446细胞的悬浮部分到离心管中,轻轻润洗贴壁NCI-H446细胞1-2次。
使用0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA消化贴壁NCI-H446细胞(T25瓶用1-2 mL),37°C消化1-2分钟。
加入3-4 mL含10% FBS的培养基终止消化。
以1:2到1:9的比例分装到新培养瓶中。
特别注意事项
NCI-H446细胞贴壁时间较长,处理后24小时内尽量不要移动培养瓶。
NCI-H446细胞对温度和CO2浓度变化敏感,条件不适宜可能导致细胞脱落或贴壁缓慢。
培养基pH应保持在7.2-7.4。
细胞冻存
使用完全培养基+5% DMSO作为NCI-H446细胞的冻存介质。
缓慢降温后存放于液氮中长期保存。
质量控制
定期进行NCI-H446细胞的支原体检测。
建议进行STR分析以确认NCI-H446细胞的身份。
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STR鉴定及相关
Amelogenin | X,Y |
CSF1PO | 13,14 |
D2S1338 | 18,20 |
D3S1358 | 17 |
D5S818 | 11 |
D7S820 | 10,11 |
D8S1179 | 13,15 |
D13S317 | 8 |
D16S539 | 12 |
D18S51 | 12,13 |
D19S433 | 13,14 |
D21S11 | 28 |
FGA | 22 |
Penta D | 12,13 |
Penta E | 9,10 |
TH01 | 8,9.3 |
TPOX | 9,11 |
vWA | 18,19 |