A549肺癌细胞（人非小细胞肺癌细胞）

A549细胞系是一种常用的人类非小细胞肺癌细胞系，由D.J. Giard等人于1972年通过一个58岁的白人男性的肺癌组织建立。
A549细胞源自肺腺癌组织的外植体肿瘤转移，并在体外培养得到，具有上皮细胞的形态特征，在体外培养时通常以单层细胞形式附着在培养瓶上生长。

A549细胞系常用于ISO 17025认证实验室的测试和校准，以分析性能、验证或比较测试方法，并在分析验证或实施过程中建立灵敏度、线性和特异性。

这种亚三倍体人类细胞系的染色体数为66，存在于24%的细胞中。染色体计数为64的细胞占22%，而染色体数为65和67的细胞也以相对较高的频率出现。A549细胞中，大多数细胞有两条X染色体和两条Y染色体，但有40%的细胞失去了一条或两条Y染色体。此外，有6个标记物以单拷贝形式存在，包括der（6）t（1；6）（q11；q27）？del（6）、del（11）（q21）、del（2）（q11）、M4和M5。染色体N2和N6每个细胞具有单个拷贝，而N12和N17通常具有4个拷贝。

A549细胞能够利用胞苷二磷酸胆碱途径合成具有高百分比去饱和脂肪酸的卵磷脂。在形态上呈上皮细胞样，具有贴壁生长的特性，在体外培养时通常以单层细胞形式附着在培养瓶上。这些细胞含有高度不饱和的脂肪酸，这对细胞膜磷脂的维持至关重要。此外，A549细胞在营养丰富的培养基中生长迅速，具有较快的倍增时间约为22小时。

A549细胞参数表

应用及研究进展：A549细胞被广泛应用于肺癌相关研究：

• 药物筛选： A549细胞被用于药物筛选，是开发新型肺癌治疗药物的重要模型之一。通过对A549细胞体外药物敏感性的研究，可以为肺癌的个体化治疗提供重要参考。

• 机制研究： 通过研究A549细胞的发生、发展和转移机制，可以深入了解非小细胞肺癌的发病过程及分子调控机制，为肺癌治疗的研究提供理论基础。

• 靶向治疗： A549细胞的研究有助于发现针对肺癌特定靶点的治疗方法。例如，A549细胞被广泛应用于EGFR靶向治疗的研究中。

• 免疫治疗： A549作为非小细胞肺癌的典型细胞模型，被广泛应用于免疫治疗的研究中。针对A549细胞的PD-L1抗体治疗已在许多临床试验中取得积极结果。

• 新型药物研发： 针对A549细胞的药物研究不断取得新进展，例如通过人工合成大分子化合物来治疗肺癌，并针对A549细胞进行验证，证实了药物的作用机制并展现出良好的治疗效果。

A549细胞裸鼠验证数据

Balb/c裸鼠的肿瘤发生分析（n=4）

M-NSG小鼠（n=10）的肿瘤发生分析。a通过时间测量肿瘤体积。b同时检查体重。

A549异种移植物模型在hPBMC（M-NSG）小鼠中的肿瘤生长曲线。（n=6）

A549异种移植物模型在hPBMC（M-NSG）小鼠中的体重变化。（n=6）

准备工作：

• 收到A549细胞后，检查A549细胞培养瓶完好性和培养液状态。

• 使用75%酒精消毒瓶壁，并将A549细胞培养瓶置于37℃培养箱中预热2-4小时。

复苏细胞（T25瓶）：

• 将A549细胞培养瓶从培养箱取出，观察A549细胞状态。

• 采集A549细胞照片（10x, 20x）及培养瓶外观照片。

• 在37℃水浴中快速解冻A549细胞冻存管中的细胞，加入培养基并混合均匀。

• 离心A549细胞悬液，弃去上清液，补充适量培养基。

• 将A549细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中，置于培养箱中培养过夜。

传代细胞：

• 当A549细胞密度达到80%-90%时，进行A549细胞传代。

• 使用胰酶/EDTA消化法或机械剥离法进行传代。

• 将传代后的A549细胞按1:2至1:4的比例分装到新的培养皿中。

冻存细胞（冻存管）：

• 收集A549细胞及培养液，装入无菌离心管中，离心收集A549细胞悬液。

• 加入含10% DMSO的冻存液，混合均匀后装入冻存管。

• 将冻存管放入-80°C或液氮中冷冻保存。

常见问题与注意事项：

• 每2-3天更换一次培养基，A549细胞密度达到80%-90%时进行传代。

• A549细胞冻存时，细胞密度为5×10^6~1×10^7/mL，使用含10% DMSO的冻存液。

• 离心速率约为1000 rpm，离心时间5-8分钟。

• 使用与原先相同的培养基和血清种类，以保持一致性。