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货号：STM-CL-6050 规格：1×10⁶cells/T25培养瓶或1mL冻存管
MB49细胞（小鼠膀胱癌细胞）
- 来源：膀胱
- 细胞特征：贴壁细胞，上皮细胞样
- 培养基：DMEM+10% FBS+1% P/S
- 其他：MB49细胞的MHC I类和II类分子表达较低或无表达，但在干扰素γ（IFN-γ）处理后，其MHC I类和II类分子的表达显著上调
MB49细胞源自C57BL/Icrf-a(t)小鼠膀胱上皮细胞，经过7,12-二甲基苯并[a]蒽（DMBA）单次24小时处理后转化而来。
MB49细胞特性特征
遗传特征：MB49细胞虽源自雄性小鼠，但100%的细胞中Y染色体丢失，这种异常在人类膀胱癌早期培养中也常见
肿瘤形成能力：MB49细胞移植到同基因小鼠中能产生癌症、在小鼠中植入后，雄性小鼠的肿瘤明显大于雌性小鼠，体现了膀胱肿瘤生长的性别差异
激素反应性：对二氢睾酮(DHT)敏感，MB49细胞表现出剂量依赖的增殖增强、对妊娠激素和人绒毛膜促性腺激素(hCG)无反应
免疫相关特征：MHC I类和II类分子表达低或无表达、经IFN-gamma处理后，MHC I类和II类分子表达显著上调
MB49细胞参数表
| 细胞名称 | MB49细胞（小鼠膀胱癌细胞） |
| 别称 | MB49；MB-49 |
| 来源 | C57BL/Icrf-a(t)小鼠膀胱上皮细胞 |
| 类型 | 肿瘤细胞，上皮细胞样 |
| 生长特性 | 贴壁生长 |
| 生物安全 | 1级 |
| 建系方法 | 化学诱导，7,12-二甲基四苯（DMBA）24小时单次处理 |
| 培养基 | DMEM + 10% FBS + 1% 青霉素-链霉素 |
| 温度 | 37°C |
| 气体环境 | 95%空气 + 5%二氧化碳，饱和湿度 |
| 换液周期 | 2-3天 |
| 密度 | 细胞密度达80%-90% |
| 比例 | 1:2-1:4（视细胞生长速度及密度决定） |
| 消化酶 | 0.25%胰蛋白酶-EDTA，消化时间3-5分钟（37°C） |
| 冻存液 | 92% FBS + 8% DMSO 或 92%完全培养基 + 8% DMSO |
| 冻存密度 | 1-2 x 10^6 cells/ml |
| 储存温度 | 液氮 |
| 复苏温度 | 37°C水浴，快速解冻 |
| 接种密度 | 2-3 x 10^5 cells/ml |
| 代数 | 10代以内 |
| 支原体 | 阴性 |
| 种属鉴定 | PCR方法确认为小鼠来源 |
| 细胞活力 | ≥95% |
| Y染色体 | 100%丢失 |
| MHC表达 | MHC I类和II类分子低表达或无表达，IFN-gamma处理后显著上调 |
| 雄激素 | 对二氢睾酮(DHT)敏感，呈剂量依赖性增殖 |
| 其他激素 | 对妊娠激素、人绒毛膜促性腺激素(hCG)无反应 |
| 同基因小鼠 | 可形成肿瘤，雄性小鼠肿瘤大于雌性 |
| 主要用途 | 膀胱癌研究，原位膀胱癌模型 |
| 特殊应用 | 性别差异研究，激素反应研究，免疫调节研究 |
| MB49-Luc | 稳定表达萤火虫荧光素酶 |
| MB49+luc | 慢病毒转染携带Luc基因 |
培养教程
MB49小鼠膀胱癌细胞培养教程
MB49细胞复苏
从液氮罐中取出冻存管，立即放入37°C水浴中轻轻摇晃解冻，时间为1-2分钟，直至完全解冻。
用75%酒精擦拭MB49细胞冻存管外表面，确保无菌操作。
将解冻后的MB49细胞悬液转移到离心管中，加入4mL预热的培养基（DMEM + 10% FBS + 1% P/S），混合均匀。
以1000 rpm离心3-4分钟，弃去上清液。
加入1-2mL培养基重悬MB49细胞，轻轻吹打混匀。
将MB49细胞悬液转移到T25培养瓶中，加入适量的培养基（总量10-12mL），置于37°C、5% CO2培养箱中过夜培养。
第二天换液，检查MB49细胞密度和状态，确保细胞良好贴壁生长。
MB49细胞传代
传代密度：当MB49细胞密度达80%-90%时进行传代。
建议按1:2至1:4比例传代，具体取决于MB49细胞的生长速度及密度。
弃去培养上清，用无钙、无镁的PBS润洗MB49细胞1-2次。
加入1mL消化液（0.25% Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，使消化液均匀覆盖所有MB49细胞。
弃去消化液，将培养瓶置于37°C培养箱中消化1-2分钟，观察MB49细胞消化情况，当细胞大部分变圆并脱落时，迅速取出。
轻敲几下培养瓶，加入少量培养基终止消化。
按6-8mL/瓶补加培养基，轻轻混匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4分钟，弃去上清液。
补加1-2mL培养基重悬MB49细胞，将细胞悬液按1:2比例分到新的含8mL培养基的培养瓶中，置于培养箱中继续培养。
MB49细胞冻存
准备工作：当MB49细胞生长状态良好时，可以进行细胞冻存。
弃去培养基，用PBS清洗MB49细胞一次，加入1mL胰酶消化，细胞变圆脱落后，加入1mL含血清的培养基终止消化。
使用血球计数板计数MB49细胞，4分钟1000 rpm离心去除上清。
加入1mL血清重悬MB49细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，确保DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x10^6/ml。
每支冻存管冻存1mL MB49细胞悬液，并做好标识。
将冻存管置于程序降温盒中，放入-80°C冰箱预冻2小时后转入液氮罐长期保存。
常见问答
- mb-49细胞系可以稳转敲低基因吗？
- MB-49细胞系可以进行基因敲低（knockdown）实验。通过使用转染技术，例如siRNA或shRNA，可以有效地降低特定基因的表达。这种方法在膀胱癌研究中被广泛应用，以研究基因在肿瘤生物学中的作用及其对细胞行为的影响。
在进行基因敲低实验时，通常需要选择合适的转染试剂和优化转染条件，以确保高效的基因沉默效果。此外，稳定转染也可以通过选择抗生素抗性标记基因来实现，从而筛选出成功转染的细胞株。 - mb-49膀胱癌细胞系可以小鼠原位成瘤么？
- 原位成瘤模型：在小鼠中建立膀胱癌原位模型的常用方法是将膀胱癌细胞（如MB-49）直接植入小鼠的膀胱内。这种方法允许研究者在生理相关的环境中观察肿瘤的生长和对治疗的反应。
该模型的建立通常涉及麻醉小鼠，通过导管将细胞悬液注入膀胱，并进行一定时间的处理以确保细胞附着和生长。
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