RT4细胞（人膀胱移行细胞乳头瘤细胞）

RT4人膀胱移行细胞乳头瘤细胞系是从63岁白人男性移行细胞乳头状瘤患者膀胱组织中分离出的上皮形态细胞，用于研究膀胱癌及免疫肿瘤学。移行细胞乳头瘤是膀胱癌的一个亚型，起源于上皮细胞。

RT4细胞系具有非整倍体的男性染色体模式，染色体数量模态数为49，范围为42至55。尽管细胞的染色体计数接近二倍体，但在个别传代中可能会观察到占主导地位的近四倍体细胞群。48号和49号核型具有一条X和一条Y染色体，而高倍性核型中则包含两条X和一条Y染色体。研究还发现四种标记染色体：del(6)(q21)、del(10)(p11)、14p+、12p+。但在高倍性中期制备的核型中，未发现标记染色体M4。

RT4细胞特性特征

• 致瘤性：RT4细胞在类固醇处理过的仓鼠的颊囊中形成肿瘤。

• 抗原表达：HLA A25（10）、A3、B12、Cw3；O型血。

• 同工酶：AK-1，1；ES-D，1-2；G6PD，B；GLO-I，1-2；Me-2，1；PGM1，1-2；PGM3，1-2。

• RT4细胞表达多种上皮细胞特异性标志物，包括细胞角蛋白（cytokeratins）和上皮细胞粘附分子（EpCAM）。
  

• RT4细胞表达表皮生长因子受体（EGFR）和其他与细胞增殖相关的受体。

• RT4细胞表达多种细胞粘附分子，如E-钙粘蛋白（E-cadherin），这与其上皮细胞特性一致。

• 分化程度：RT4细胞是一种高分化的膀胱癌细胞系，保留了许多正常膀胱上皮细胞的特征。

• 侵袭性：相比其他膀胱癌细胞系，RT4细胞表现出较低的侵袭性和转移潜能。

• 药物敏感性：由于其高分化特性，RT4细胞对某些化疗药物可能表现出较高的敏感性。

• 细胞极性：RT4细胞保持了一定程度的细胞极性。

RT4细胞参数表

RT4人膀胱移行细胞乳头瘤细胞培养教程

RT4细胞复苏

• 从液氮中取出冻存的RT4细胞，迅速放入37°C水浴中解冻。

• 将解冻后的RT4细胞悬液转移到含有预热完全培养基的离心管中。

• 在1000 rpm下离心5分钟，弃去上清液。

• 用新鲜培养基重悬RT4细胞，然后转移到培养瓶中。

• 将培养瓶放入37°C、5% CO2培养箱中培养RT4细胞。

RT4细胞传代

• 当RT4细胞密度达到80-90%时进行传代。

• 弃去旧培养基，并用PBS缓冲液轻轻冲洗RT4细胞1-2次。

• 加入适量0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，37°C下消化2-3分钟。

• 观察RT4细胞在显微镜下变圆并开始脱落时，加入含血清的完全培养基终止消化。

• 吹打RT4细胞悬液，收集到离心管中。

• 在1000 rpm下离心5分钟，弃去上清。

• 用新鲜培养基重悬RT4细胞，并以1:2或1:3的比例接种到新的培养瓶中。

• 将培养瓶放回培养箱继续培养RT4细胞。

RT4细胞换液

• 每2-3天更换一次培养基：弃去旧培养基，加入预热的新鲜完全培养基以确保RT4细胞的健康生长。

RT4细胞冻存

• 制备冻存液：90%胎牛血清加10%二甲基亚砜（DMSO）。

• 收集对数生长期的RT4细胞。

• 在1000 rpm下离心5分钟，弃去上清。

• 用冻存液重悬RT4细胞，将密度调整至1-2×10^6个细胞/mL。

• 将RT4细胞悬液分装到冻存管中，每管1 mL。

• 将冻存管放入程序降温盒中，于-80°C冰箱中存放过夜。

• 次日将RT4细胞冻存管转移至液氮中长期保存。

注意事项

• 保持无菌操作以防止RT4细胞污染。

• 定期检查RT4细胞的形态和生长状况。

• 避免RT4细胞过度生长或密度过高。

• 使用前请仔细阅读RT4细胞说明书，了解具体的培养条件和操作要求。

维持RT4细胞培养环境稳定的方法

• 使用适合RT4细胞的培养基，确保其含有所有必要的营养成分。

• 确保培养箱的温度、湿度和CO2浓度稳定，适合RT4细胞生长。

• 定期更换RT4细胞培养基，以确保营养供应和代谢废物的清除。

• 在RT4细胞密度达到80-90%时及时进行传代，避免过度拥挤。

RT4细胞培养常见问题及解决方案

• 生长缓慢：可能是由于培养基成分不适合、温度或CO2浓度不正确、或RT4细胞接种密度过低。应调整这些条件。

• 细胞贴壁不良：可能由于培养基表面处理不当或胰蛋白酶消化时间过长。确保培养基的质量和适当的消化时间适合RT4细胞。

• 细胞形态异常：可能由于培养环境不适、污染或RT4细胞老化。需检查培养条件和防止污染。

• 细胞污染：细菌、真菌或支原体污染可导致培养基浑浊或pH变化。严格的无菌操作和定期检查培养基的清澈度是防止RT4细胞污染的关键。

• 细胞脱落：可能是由于培养基pH异常或机械损伤。确保适当的培养基pH和操作温和以保持RT4细胞的贴壁。

• 细胞分化和传代困难：长期培养可能导致RT4细胞特性改变，影响实验结果。保持适当的传代频率和胰蛋白酶浓度可改善此问题。