RKO-E6人结肠癌转基因细胞

RKO-E6细胞系是通过将人乳头状病毒（HPV）E6癌基因转染入人结肠癌细胞系RKO而获得的。
RKO-E6细胞系的转基因特性包括：HPV E6基因通过脂质体法转染入细胞，使用的载体为pCMV（巨细胞病毒启动子）。该基因稳定地整合在细胞基因组中，并受到巨细胞病毒启动子的控制。
RKO-E6细胞系可以与其亲本细胞系RKO一起使用，以研究p53缺失对细胞参数的影响，如p53介导的转录和凋亡。

RKO-E6人结肠癌转基因细胞特征特性

• p53蛋白水平：RKO-E6细胞中的p53蛋白水平显著低于其亲本细胞系RKO，这是由于HPV E6蛋白的表达导致p53蛋白被降解。

• HPV E6蛋白表达：RKO-E6细胞稳定表达人乳头瘤病毒（HPV）E6蛋白，该蛋白与p53结合并促进其泛素化降解，从而降低p53蛋白水平。

• DNA损伤修复能力：RKO-E6细胞对紫外线诱导的DNA损伤修复能力降低，这主要是由于p53功能受到抑制，影响了p53介导的DNA修复通路。

• HPV E6基因表达：RKO-E6细胞中的HPV E6基因受巨细胞病毒（CMV）启动子控制，确保了E6基因的持续高效表达。

• p53功能抑制：由于E6蛋白的表达，RKO-E6细胞中的p53蛋白功能受到显著抑制，但并非完全缺失。

• h-TRβ1表达：RKO-E6细胞和其亲本RKO细胞均缺乏内源性人甲状腺受体核受体β1（h-TRβ1）的表达。

• 转基因整合：HPV E6基因通过脂质体法转染，并稳定整合到RKO细胞基因组中，形成RKO-E6细胞系。

• 野生型p53基因：RKO-E6细胞保留了野生型p53基因，但其蛋白产物受到E6蛋白的抑制。

• 应用价值：RKO-E6细胞可与RKO细胞对比，用于研究p53功能抑制对细胞行为的影响，包括但不限于转录调控、凋亡、细胞周期和DNA损伤修复等过程。

• 成瘤性：RKO-E6细胞保留了RKO细胞的成瘤性，能在免疫缺陷小鼠中形成肿瘤，并在体外软琼脂中形成集落，这反映了其转化表型。

RKO-E6人结肠癌转基因细胞参数表

RKO-E6人结肠癌转基因细胞培养教程

传代方法

• 用PBS轻轻冲洗RKO-E6细胞单层。

• 加入适量胰蛋白酶-EDTA溶液，在37℃孵育2-3分钟。

• 轻轻拍打培养瓶，使RKO-E6细胞脱落。

• 加入等量完全培养基终止消化。 

• 离心收集RKO-E6细胞，重悬于新鲜完全培养基中。

• 按所需比例接种到新的培养瓶中。

细胞冻存

• 冻存液：90%完全培养基 + 10% DMSO

• 冻存密度：约5 x 10^6 cells/ml

• 缓慢降温：逐步降温至-80℃，最终保存在液氮中。

细胞复苏

• 快速解冻RKO-E6细胞于37℃水浴中。

• 将细胞悬液转移到含有预热完全培养基的培养瓶中。

• 24小时后更换新鲜培养基，去除DMSO。

注意事项

• 细胞监测：定期观察RKO-E6细胞的形态和生长状态，确保细胞保持其特征性表型。

• 无菌操作：严格保持无菌操作，以防止污染。

• 传代管理：避免RKO-E6细胞过度生长，及时传代。

• 支原体检测：定期进行支原体检测，以确保RKO-E6细胞系的纯度和真实性。

特殊要求

• 生物安全：由于RKO-E6细胞含有转基因，操作时需遵守生物安全二级实验室规范。

• 基因表达：观察RKO-E6细胞是否保持稳定的HPV E6基因表达。

• 频率：每2-3天更换一次培养基。

• 操作方法：小心吸出旧培养基，加入预热的新鲜完全培养基。

• 建议范围：一般建议RKO-E6细胞不超过20-30代，以确保细胞特性的稳定性。

• 根据实验需求：具体传代次数应根据实验目的和细胞表现来决定。

培养条件下的表现

• 标准条件：在37℃、5% CO2下，使用含10%胎牛血清的MEM培养基，RKO-E6细胞通常表现良好，保持其上皮样形态和贴壁生长特性。

• 血清浓度：降低血清浓度可能会影响RKO-E6细胞生长速度，但可能有助于某些特定实验。

• 温度变化：温度偏离37℃可能会影响RKO-E6细胞生长速度和代谢活性。

• 氧气浓度：低氧条件可能会影响RKO-E6细胞的某些特性，特别是与癌症相关的研究中。