T84人结肠癌细胞系（人结肠腺癌肺转移细胞系）

T84细胞系源自一名72岁男性结肠癌患者的肺转移灶，是一种可移植的人类癌细胞系。
T84细胞系具有56条染色体，多倍体发生率为12.4%，并且28%的细胞表现出多倍体。大多数中期细胞中观察到18个标记，正常的X染色体和13号染色体缺失。2号、4号和22号染色体为单拷贝，而12号染色体则有4拷贝。Q带分析未发现Y染色体。约50%的细胞出现了染色体不稳定性（DM）。

在无胸腺小鼠中，通过连续传代23次建立了T84细胞系。T84细胞在培养中表现为单层融合结构，并显示出紧密的连接和桥粒。

T84人结肠癌细胞系特性特征

• 癌胚抗原（CEA）：在细胞培养中，CEA的表达量为每10天每10^6个细胞600 ng/mL。

• 角蛋白：细胞在免疫过氧化物酶染色中显示角蛋白阳性反应。

• T84细胞表达多种肽类激素和神经递质的受体；维持电解质的定向运输能力

• 具有致瘤性：T84细胞在裸小鼠中21天内100%形成肿瘤；裸鼠移植过程中保持原始结肠癌的组织学特征；
  

• 具有转移性，特别是肺转移；

• 同工酶表达：AK-1，1；ES-D，1；G6PD，B；GLO-I，1-2；Me-2，1-2；PGM1，1；PGM3，1

• 功能特性：形成紧密连接，参与构建肠道屏障；具有多种肽类激素和神经递质的受体；维持电解质的定向运输能力

T84人结肠癌细胞系参数表

T84人结肠癌细胞系培养教程

T84细胞复苏

• 准备：预热T84细胞培养基至37℃；预热水浴锅至37℃

• 解冻：从液氮罐中取出T84细胞冻存管，迅速在37℃水浴中解冻，轻轻摇动冻存管，约1-2分钟

  
  

• 处理细胞：

• 解冻后用75%乙醇消毒冻存管外表面

• 在无菌操作台中，将T84细胞悬液转移至15ml离心管

• 加入10ml预热的完全培养基，轻轻混匀

  
  

• 离心：以1000rpm离心5分钟，弃去上清液；重悬T84细胞于10ml预热的完全培养基中

• 接种：将T84细胞悬液转移至T25培养瓶中；放入37℃、5% CO₂培养箱中培养

T84细胞传代

• 准备：预热培养基至37℃；预热胰蛋白酶（Trypsin-EDTA）至37℃

• 观察：使用倒置显微镜观察T84细胞，确认细胞融合度达到70-80%

• 去除旧培养基：在无菌操作台中，吸去培养瓶中的旧培养基

• 洗涤：加入5ml无钙镁PBS（磷酸盐缓冲液），轻轻摇动培养瓶，然后去除PBS

• 消化细胞：加入1-2ml胰蛋白酶，均匀覆盖T84细胞层；放入培养箱中消化1-2分钟，观察细胞开始脱落

• 中和胰蛋白酶：加入5-10ml预热的完全培养基中和胰蛋白酶；轻轻吹打细胞悬液，确保T84细胞完全脱落

• 离心：以1000rpm离心5分钟，弃去上清液；重悬T84细胞于适量的完全培养基中

• 接种：根据需要将T84细胞悬液分装到新的培养瓶中；添加适量的完全培养基，放入培养箱中培养

T84细胞冻存

• 准备：预热培养基和冻存液（10% DMSO + 90% FBS）至4℃

• 收集细胞：按照传代步骤消化并收集T84细胞

• 离心：以1000rpm离心5分钟，弃去上清液

• 重悬细胞：将T84细胞重悬于冷冻保存液中，细胞浓度为1-2 x 10^6 cells/ml

• 分装：将T84细胞悬液分装至冻存管中，每管1ml

• 程序降温：将冻存管放入程序降温盒中，以-1℃/分钟的速度降温至-80℃

• 转移液氮罐：24小时后，将冻存管转移至液氮罐中长期保存

T84细胞的培养环境控制参数

• 温度：37℃

• 二氧化碳浓度：5% CO₂，以维持T84细胞培养基的pH值在7.2-7.4范围内

• 湿度：高湿度（通常95%以上）以防止培养基蒸发

T84细胞的培养时间

• 复苏后：T84细胞复苏后通常需24-48小时贴壁和恢复

• 传代周期：T84细胞通常在达到70-80%融合度时进行传代，约需2-3天

• 实验准备：如果用于实验，T84细胞通常需要在传代后再培养1-2天以确保细胞状态稳定