RKO细胞系（人结肠腺癌细胞系）

RKO细胞系来源于人类结肠腺癌组织，是一种低分化的结肠癌细胞系，最早由美国国家癌症研究所（NCI）的研究人员分离和建立。RKO细胞具有上皮样细胞形态，主要以贴壁生长的方式繁殖。
RKO细胞是RKO-E6和RKO-A545-1的亲本细胞系（同源）。RKO细胞可以用作研究p53和gadd45对细胞参数影响的对照细胞系。

RKO细胞系特性特征

• P53基因：RKO细胞含有野生型P53基因，P53蛋白水平高于其衍生细胞系RKO-E6。

• 甲状腺受体：RKO细胞缺乏内源性人甲状腺受体核受体(h-TRβ1)。

• 尿激酶受体（u-PAR）：RKO细胞表达尿激酶受体（u-PAR），这在癌症侵袭和转移过程中起重要作用。
  

• 致瘤性：RKO细胞在裸鼠中具有成瘤性，并能在软琼脂中形成集落，这表明其具有较强的恶性特性和侵袭能力。

• 低分化：RKO细胞是一个低分化的结肠癌细胞系，表明其具有较高的增殖能力和较低的分化状态。
  

• 相关细胞系：RKO细胞是RKO-E6细胞和RKO-AS45-1细胞的亲本细胞系

RKO细胞系参数表

RKO人结肠腺癌细胞系培养教程

RKO细胞复苏

• 从液氮中取出冻存管，迅速放入37°C水浴中解冻RKO细胞

• 解冻后立即将RKO细胞悬液转移到含预热培养基的离心管中

• 1000 rpm离心5分钟，弃上清

• 用新鲜培养基重悬RKO细胞，转移到培养瓶中

日常培养

• 每2-3天更换一次培养基；观察RKO细胞生长状态，密度达到70-80%时进行传代

RKO细胞传代

• 用PBS轻轻清洗RKO细胞层1-2次

• 加入适量胰蛋白酶-EDTA溶液，37°C孵育2-3分钟

• 轻轻拍打培养瓶，使RKO细胞脱落

• 加入含血清的培养基终止消化

• 1000 rpm离心5分钟，弃上清

• 用新鲜培养基重悬RKO细胞，按1:2至1:6的比例接种到新的培养瓶中

RKO细胞冻存

• 收集对数生长期的RKO细胞

• 制备冻存液：90%血清 + 10% DMSO

• 调整RKO细胞浓度至1×10^6 cells/mL

• 将RKO细胞悬液分装到冻存管中

• 使用程序降温盒，将RKO细胞缓慢降温至-80°C

• 24小时后转移到液氮中长期保存

注意事项

• 细胞污染:

• 严格遵守无菌操作规程，定期进行支原体检测，确保RKO细胞培养环境和培养基的无菌状态。

• 避免不同细胞系之间的交叉污染，使用专用的培养设备和耗材。

  
  

• 培养条件不当:

• 保持培养箱温度恒定在37°C，避免温度波动影响RKO细胞。

• 确保培养箱气相为95%空气 + 5%二氧化碳，避免二氧化碳浓度波动。

• 维持培养箱湿度在70%-80%，避免培养基蒸发过快。

  
  

• 培养基问题:

• 使用新鲜、无菌的培养基，避免使用过期或受污染的培养基。

• 选择优质胎牛血清（FBS），确保RKO细胞培养血清的稳定性和一致性。

• 避免长期依赖抗生素，以防抗生素耐药性。

  
  

• 细胞处理不当:

• 避免胰蛋白酶消化时间过长，消化时间一般为1-2分钟。

• 保持RKO细胞密度在适当范围内（70-80%），避免过度生长或细胞稀疏。

  
  

• 传代和冻存问题:

• 记录RKO细胞传代次数，避免使用传代次数过多的细胞。

• 使用程序降温盒缓慢降温至-80°C，再转移到液氮中长期保存RKO细胞。复苏时迅速解冻并立即加入预热培养基。

  
  

• 培养基更换频率:

• 每2-3天更换一次培养基，保持培养基新鲜。

  
  

• 细胞状态监控:

• 定期观察RKO细胞形态和生长状态，及时处理异常情况，如细胞形态变化、增殖缓慢或死亡率增加。