L Wnt-3A小鼠皮下结缔组织细胞

L Wnt-3A细胞是一种来源于小鼠皮下结缔组织的细胞系，具有成纤维细胞样形态。L Wnt-3A细胞从100日龄雄性小鼠的乳晕脂肪组织中分离出来，并经过特定基因修饰以表达Wnt-3A基因。L Wnt-3A细胞因其能够分泌具有生物活性的Wnt-3A蛋白，成为生产Wnt-3A条件培养基的最佳来源。

L Wnt-3A细胞系是通过在L-M(TK-)细胞中转染Wnt-3A表达载体并使用G418筛选出稳转株而获得。L Wnt-3A细胞属于小鼠C3H/An品系。由于Wnt-3A条件培养基除了含有Wnt-3A蛋白外，还包含其他因子，因此在相关实验中必须使用来自亲本细胞系的对照条件培养基，以确保实验结果的准确性。

L Wnt-3A皮下结缔组织细胞特性特征

• Wnt-3A蛋白分泌：L Wnt-3A细胞能分泌具有生物活性的Wnt-3A蛋白。
  

• 糖蛋白性质：Wnt-3A是一种分泌性糖蛋白，具有多种信号功能。

• Wnt-3A基因表达：这些细胞稳定表达Wnt-3A基因。
  

• 基因功能：Wnt-3A基因编码的蛋白在胚胎发育过程中控制多种模式形成和生长事件。

• 稳定表达：L Wnt-3A细胞是通过转染Wnt-3A表达载体并在含G418的培养基中筛选出的稳转株，因此能持续稳定地表达Wnt-3A。

• 条件培养基产生：这些细胞是生产Wnt-3A条件培养基的最佳来源

L Wnt-3A细胞参数表

L Wnt-3A小鼠皮下结缔组织细胞培养教程

L Wnt-3A细胞复苏

• 从液氮中取出L Wnt-3A细胞冻存管，迅速放入37℃的水浴中，轻轻摇动1-2分钟，直至细胞完全融化。

• 将L Wnt-3A细胞悬液转移到含10 mL预热完全培养基的15 mL离心管中。

• 在1000 rpm下离心5分钟，弃去上清。

• 用5 mL完全培养基重悬L Wnt-3A细胞。

• 将细胞悬液转移至T25培养瓶中，放入37℃，5% CO₂培养箱中培养L Wnt-3A细胞。

日常培养

• 每1-2天观察L Wnt-3A细胞的生长状况，根据生长速度决定换液频率。

• 通常每2-3天更换一次L Wnt-3A细胞的培养基。

• 弃去旧培养基后，用PBS轻轻冲洗L Wnt-3A细胞1-2次。

• 加入新鲜预热的完全培养基。

L Wnt-3A细胞传代

• 当L Wnt-3A细胞密度达到70%-80%时进行传代：

• 弃去培养基，用PBS轻轻冲洗L Wnt-3A细胞1-2次。

• 加入适量0.25%胰酶-EDTA溶液，37℃孵育1-2分钟。

• 在显微镜下观察，当L Wnt-3A细胞变圆并开始脱落时，轻拍培养瓶。

• 加入等体积含血清的培养基终止消化。

• 将L Wnt-3A细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5分钟。

• 弃去上清，用新鲜培养基重悬L Wnt-3A细胞。

• 按1:2或1:3的比例将L Wnt-3A细胞接种到新的培养瓶中。

L Wnt-3A细胞冻存

• 收集对数生长期的L Wnt-3A细胞。

• 按传代方法收集L Wnt-3A细胞。

• 用冻存培养基（含10% DMSO）重悬L Wnt-3A细胞，调整细胞密度至1-2×10^6/mL。

• 将L Wnt-3A细胞悬液分装至冻存管中，每管1 mL。

• 将冻存管放入程序降温盒中，置于-80℃冰箱中过夜。

• 次日将L Wnt-3A细胞冻存管转入液氮中长期保存。

Wnt-3A条件培养基制备

• 培养L Wnt-3A细胞：使用含G418的完全培养基在37℃，5% CO₂环境下培养L Wnt-3A细胞。

• 收集培养基：当L Wnt-3A细胞达到70-80%汇合度时，更换为新鲜的完全培养基。

• 分泌期：继续培养3-4天，以便L Wnt-3A细胞分泌Wnt-3A蛋白到培养基中。

• 收集和处理：收集L Wnt-3A细胞的培养基，并通过离心或过滤去除细胞碎片。

• 浓缩和储存：收集的L Wnt-3A细胞培养基可以直接使用或进行浓缩处理；分装后在-20℃或-80℃储存备用。

• 质量控制：测试Wnt-3A的活性，确保L Wnt-3A细胞培养基中含有生物活性Wnt-3A蛋白。

注意事项

• 收到L Wnt-3A细胞后，首次传代建议在T25培养瓶中以1:2的比例传代。

• 运输用的培养基不应再用于培养L Wnt-3A细胞，需使用新配制的完全培养基。

• 如果因运输振动导致L Wnt-3A细胞脱落，需要离心回收。

• 定期检查L Wnt-3A细胞是否有污染或形态异常。

• 所有操作应在生物安全柜中进行，以确保无菌操作。

• Wnt-3A条件培养基中含有其他因子，在实验中建议使用亲本细胞株(ATCC CRL-2648)作为对照。