细胞冻存培养基

5% 至 10% 的甘油和 DMSO 是最常见的冻存保护剂。虽然 DMSO 对细胞有毒性,但它比甘油渗透细胞的速度快得多,并且产生更可重复的结果。不过DMSO 会导致某些细胞分化(例如 HL-60 细胞),并且对某些细胞(例如 HBE4-E6/E7 肺上皮细胞)可能毒性过大。在这些情况下应使用甘油。甘油可以通过高压灭菌进行灭菌,而 DMSO 必须通过过滤进行灭菌。处理任何 DMSO 溶液时都应小心,因为它会迅速渗透完整的皮肤,并可能携带有毒污染物。
仅使用试剂级(或更高级,如细胞培养级)DMSO 或甘油。将二者分装并避光保存。 思泰默提供的DMSO已经过全面测试,可用于细胞培养。
对于在无血清培养基中生长的细胞,在细胞冻存和恢复培养基中添加 50% 条件培养基(细胞在其中生长 24 小时的无血清培养基)可提高恢复和存活率。在无血清冻存培养基中添加 10% 至 20% 细胞培养级牛血清白蛋白也可提高冻存后存活率。
无血清冻存培养基也已开发出来。思泰默无血清细胞冻存培养基 既可用于在补充血清的生长培养基中培养的细胞,也可用于在无血清条件下生长的细胞。这种专有配方含有 10% DMSO 和甲基纤维素,适用于贴壁和悬浮细胞培养物的冻存保存。使用无血清冻存培养基冻存保存的细胞显示出与在 DMSO 和 FBS 中保存的细胞相当的活力和贴壁率(贴壁细胞)
使用无血清细胞冻存保存的细胞其活力水平和贴壁百分比与在 DMSO 和 FBS 中保存的细胞相当。
冻存培养基配方的其他变化包括高浓度(高达 90%)血清,据推测可提供一些冻存保护以及额外的生长因子;使用专为低温条件设计的平衡盐溶液代替专为 37°C 孵育设计的培养基;并添加凋亡抑制剂,可防止恢复后延迟发生细胞死亡。21需要根据经验确定单个细胞系的最佳配方。
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