
P815细胞(小鼠肥大细胞瘤细胞)
- 来源:肥大细胞
- 细胞特征:半贴半悬,圆形
- 培养基:RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
- 其他:基因表达:溶菌酶
P815小鼠肥大细胞瘤细胞系是从DBA/2小鼠的肥大细胞瘤中分离出来。P815细胞最初是在小鼠体内检测到的,之后被培养成稳定的细胞系,广泛用于免疫学研究。
P815细胞特性特征
分子特征:产生溶菌酶(lysozyme)、缺乏抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用
吞噬特征:能够吞噬乳胶微球和小粒乳汁、不能吞噬酵母聚糖或卡介苗
P815细胞对硫酸右旋糖苷、脂多糖(LPS)或结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)不敏感,这些物质不能抑制其生长
P815细胞经检测为肢骨发育畸形病毒(鼠痘)阴性
基因表达特征:表达溶菌酶基因
P815小鼠肥大细胞瘤细胞参数表
细胞名称 | P815细胞(小鼠肥大细胞瘤细胞) |
细胞别称 | 小鼠肥大细胞瘤细胞; P-815; P 815 |
来源 | 小鼠DBA/2肥大细胞瘤 |
生长特性/形态 | 悬浮生长,部分轻微贴壁;圆形 |
细胞代数 | 10代以内 |
安全等级 | 生物安全等级1; |
保藏机构 | ATCC (TIB-64); DSMZ (ACC-1) |
培养基 | RPMI-1640; 10% FBS; 1% P/S |
培养条件 | 37°C; 95%空气 + 5%CO2 |
传代信息 | 比例1:2; 每周3次; 密度80%-90%时传代 |
倍增时间 | 约18-22小时 |
染色体/基因 | 染色体数34~41; 表达溶菌酶 |
吞噬特性 | 可吞噬乳胶微球和小粒乳汁; 不吞噬酵母聚糖或卡介苗 |
细胞毒性 | 无抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用 |
药物反应 | 对硫酸右旋糖苷、LPS或PPD不敏感 |
病毒/支原体 | 肢骨发育畸形病毒(鼠痘)阴性; 支原体阴性 |
冻存/运输 | 无血清冻存液,液氮储存; 干冰或常温运输 |
细胞数量 | 1×10^6 cells/T25培养瓶或1mL冻存管 |
用途 | 仅供科研使用 |
传代方法 | 收集悬浮细胞,贴壁细胞可用刮刀刮下 |
培养教程
P815小鼠肥大细胞瘤细胞培养教程
P815细胞接收处理
收到T25瓶装P815细胞后,用75%酒精消毒瓶壁。
将T25瓶置于37°C培养箱中放置2-4小时,以稳定P815细胞状态。
在显微镜下观察P815细胞状态,并拍照记录。
P815细胞传代方法
P815细胞悬浮收集:收集培养瓶中的P815细胞悬浮细胞、对于轻微贴壁的P815细胞,可以使用细胞刮刀轻轻刮下。
离心:以1000rpm离心5分钟,收集P815细胞、弃去上清液,保留P815细胞沉淀。
重悬:加入1-2ml新鲜完全培养基重悬P815细胞。
传代:按1:2到1:4的比例分配P815细胞到新的培养容器中、每个新容器中加入8ml新鲜完全培养基。
P815细胞传代密度和频率
当P815细胞密度达到80%-90%时进行传代。
通常每周传代3次。
以20万P815细胞/mL密度开始新的培养。
特别注意事项
首次传代:建议使用1:2的比例以保证P815细胞的健康生长。
收集悬浮细胞:传代时需确保收集培养基中的所有悬浮P815细胞。
培养基更换:运输用的培养基不可继续用于P815细胞培养,需更换为新配制的完全培养基。
P815细胞冻存细胞复苏
收到冻存管后,立即转入液氮或直接进行复苏。
复苏后,将P815细胞悬液转移到离心管。
以1000rpm离心5分钟。
加入10-15ml新鲜培养液重悬P815细胞。
分配到两个T25培养瓶内进行P815细胞培养。
P815细胞观察和维护
显微镜观察:定期在显微镜下观察P815细胞状态。
pH值稳定:保持培养基pH值稳定,必要时更换培养基以维护P815细胞的健康。
防止污染:操作时应保持无菌环境,注意防止P815细胞培养中的细菌或真菌污染。
P815细胞常见问题
细胞贴壁:部分P815细胞可能会轻微贴壁,这是正常现象。
细胞密度控制:需维持适当的P815细胞密度,以保证细胞的健康生长。
培养基问题:使用运输用的培养基继续培养P815细胞可能会影响细胞生长。
污染风险:如其他细胞培养一样,需要注意防止P815细胞培养中的细菌或真菌污染。
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参考文献
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