小鼠表皮黑色素细胞（原代细胞）

小鼠表皮黑色素细胞主要来源于小鼠皮肤的基底层，具有重要的色素生成功能。表皮黑色素细胞源自胚胎期的神经嵴，随着发育的推进，它们迁移至皮肤表皮及毛囊区域。表皮是由复层扁平上皮构成，其功能主要是保护皮肤免受物理、化学和生物性损伤。在表皮的结构中，黑色素细胞占据基底层的少量区域，约占该层细胞的5%左右。

黑色素细胞的主要功能是合成黑色素，这一过程通过酪氨酸的酶促反应进行，最终生成的黑色素不仅为皮肤和毛发提供色素，还在吸收紫外线方面起着重要作用，从而减轻紫外线对皮肤的损害。黑色素细胞在皮肤的免疫防御中扮演着至关重要的角色。异常的黑色素细胞功能或数量变化可能导致多种皮肤色素病理状态的发生，如白癜风和黄褐斑等。

小鼠表皮黑色素细胞特性特征

• 基因表达：小鼠表皮黑色素细胞表达多种与黑色素合成相关的基因，如TYR（酪氨酸酶）、TYRP1（酪氨酸酶相关蛋白1）和MITF（黑色素细胞诱导因子）。MITF在黑色素细胞的发育、存活和功能中起关键作用。

• 黑色素合成：黑色素细胞通过酪氨酸的氧化和聚合过程合成黑色素，主要有真黑色素和现象黑色素两种类型。合成的黑色素不仅赋予皮肤颜色，还能有效吸收紫外线，保护皮肤免受紫外线伤害。
  

• 信号传导：小鼠表皮黑色素细胞对外界刺激（如紫外线）的反应能力强，通过MC1R（黑色素刺激受体）等信号通路调节黑色素的合成。

• 基因组特征：研究发现与黑色素合成相关的多个基因如KLF6、COMMD3等在调节黑色素小体成熟和功能方面发挥重要作用。全基因组筛选揭示了169个与人类色素沉着相关的功能基因，这些基因在小鼠模型中也有相应的表达。
  

• 遗传变异：不同品种的小鼠在黑色素合成能力上存在差异，例如C57BL/6小鼠表现出较高的黑色素合成能力，而其他品种可能表现出不同的表型

小鼠表皮黑色素细胞参数表

原代小鼠表皮黑色素细胞培养教程

小鼠表皮黑色素细胞复苏

• 从液氮罐中取出小鼠表皮黑色素细胞的冻存管。
  

• 准备37℃水浴锅，确保水位不超过冻存管的盖子，以避免冻存液溢出并污染。

• 将冻存管迅速浸入水浴锅中，并轻轻摇动以加速冻存液的融化。
  

• 待冻存液完全融化后，使用75%的酒精喷洒冻存管表面，擦拭去除外部的液体。

• 将细胞悬液转移到预先准备好的含10 mL M254完全培养基的离心管中。

• 以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。
  

• 用PBS（磷酸盐缓冲液）重悬细胞，再次离心5分钟，确保去除残留的冻存液。

• 将细胞重悬于M254/HMGS培养基中，准备接种。

• 将重悬后的细胞按适宜浓度接种到细胞培养板中。
  

• 将细胞板放入37℃、5% CO₂培养箱中，静置培养。

• 次日检查细胞的贴壁情况，并根据需要更换培养基。

小鼠表皮黑色素细胞传代

• 当小鼠表皮黑色素细胞的汇合度达到80%-90%时，准备进行细胞传代。使用0.25%胰蛋白酶进行细胞消化。
  

• 吸出原培养基，用PBS洗涤一次，去除残余培养基。
  

• 加入适量的0.25%胰蛋白酶溶液，轻轻摇动培养瓶，使其均匀覆盖细胞。

• 在37℃条件下消化1-2分钟，观察细胞是否开始脱落。

• 快速加入2 mL含10%胎牛血清的培养基，终止消化过程，并轻轻吹打形成细胞悬液。
  

• 将细胞悬液转移至离心管中，进行1000 rpm、5分钟的离心处理，弃去上清液。

• 将小鼠表皮黑色素细胞重悬于新鲜的完全培养基中，并根据需要调整细胞浓度。
  

• 将细胞悬液接种至新的培养瓶中，继续在37℃、5% CO₂培养箱中培养。

小鼠表皮黑色素细胞冻存

• 收集小鼠表皮黑色素细胞密度达到70%-80%的培养物，用于冻存。
  

• 吸出培养基并加入0.25%胰蛋白酶溶液进行消化，通常消化2分钟。
  

• 观察细胞开始脱落后，立即加入血清终止消化。

• 转移细胞悬液至离心管中，进行1000 rpm、5分钟离心，弃去上清液。

• 加入含10%二甲基亚砜（DMSO）的冷冻保存液，重悬小鼠表皮黑色素细胞。DMSO作为冷冻保护剂，能够减轻低温对细胞的损伤。
  

• 将重悬后的细胞悬液分装至冻存管中，并做好标记。

• 将冻存管置于-80℃的冷冻盒中，以慢速冷却方式冷冻过夜。第二天，将冻存管转移至液氮罐中进行长期保存。