原代大鼠表皮角化细胞

大鼠表皮角化细胞（Rat Epidermal Keratinocytes, 简称REK）是从大鼠皮肤组织的表皮层中提取的原代细胞，广泛应用于生物医学和临床研究领域。

大鼠表皮角化细胞通常通过皮肤表皮层的酶解法分离获得。分离过程常使用中性蛋白酶及胰蛋白酶-胶原酶混合酶溶液，以确保角化细胞的活性和纯度。大鼠表皮角化细胞在体外培养环境中能够模拟体内的生理特性，有助于研究创伤愈合、皮肤屏障功能及皮肤疾病的相关机制。

在细胞增殖和分化过程中，大鼠表皮角化细胞的分裂活性集中在基底层，部分在棘层中也存在活性。随着这些细胞逐渐向表层迁移，其增殖能力逐渐丧失，但分化程度增加。

原代大鼠表皮角化细胞特性特征

• 角质素（Keratin）是表皮角化细胞的重要标志物。主要有：K5：主要表达于基底层细胞，是未分化状态的标志；K10：主要表达于角化的表皮细胞，是分化状态的标志。

• 基因表达：表皮角化细胞在不同阶段表达不同的基因。例如，在分化过程中，K5的表达量会增加，而K10的表达量则会降低。这种变化反映了细胞从未分化到分化的过程。

• 信号通路：研究表明，某些因子（如CCN1）能够通过激活Wnt/β-Catenin信号通路促进角化细胞的增殖和去分化。这些信号通路在调控表皮发育和修复过程中起着重要作用

原代大鼠表皮角化细胞参数表

原代大鼠表皮角化细胞培养教程

大鼠表皮角化细胞复苏

• 从液氮罐中取出冻存的大鼠表皮角化细胞管，穿戴防护设备（如防爆管面具）。
  

• 将大鼠表皮角化细胞的冻存管迅速放入37℃水浴中解冻，期间轻轻晃动冻存管，直至管内无冰晶。

• 用75%的酒精彻底擦拭冻存管外表，以防污染物进入大鼠表皮角化细胞的培养环境。
  

• 打开冻存管，将大鼠表皮角化细胞悬液转移至15ml离心管中，加入5ml完全培养基。
  

• 以1000rpm离心5分钟，弃去上清液。
  

• 用5ml新鲜完全培养基重悬大鼠表皮角化细胞，将悬液转移至25cm²培养瓶中。

• 将培养瓶置入37℃、5% CO₂的培养箱中静置培养，并于次日更换新鲜完全培养基，以去除冷冻保护剂。
  

大鼠表皮角化细胞传代

• 当大鼠表皮角化细胞覆盖培养瓶80%左右时，准备进行传代。
  

• 弃去旧培养基，并用无钙镁的PBS溶液清洗大鼠表皮角化细胞一次，以去除残余培养基和废物。
  

• 加入约1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，轻轻摇晃培养瓶使酶液均匀覆盖细胞层。
  

• 37℃下消化1-3分钟，待大鼠表皮角化细胞逐渐回缩、变圆并脱落。

• 加入完全培养基终止胰酶反应。用移液器轻轻吹打大鼠表皮角化细胞悬液，并转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
  

• 弃去上清后，用新鲜完全培养基重悬大鼠表皮角化细胞，按1:2的比例分装至新的25cm²培养瓶中。
  

• 将分瓶后的大鼠表皮角化细胞放入培养箱继续培养，待细胞贴壁后按每2-3天更换培养基。

大鼠表皮角化细胞培养注意事项

• 无菌操作：整个大鼠表皮角化细胞培养过程应严格无菌操作，以防污染。

• 胰酶消化时间控制：消化时间不宜过长，以防影响大鼠表皮角化细胞的贴壁性和增殖能力。

• 培养基储存与处理：完全培养基在4℃保存，避免反复冻融，通常保存3-6个月。

• 培养基换液与细胞监控：定期观察大鼠表皮角化细胞形态和生长状态。如发现异常，及时处理。

• 贴壁增强措施：建议传代时使用鼠尾胶原Ⅰ或其他包被材料，提升大鼠表皮角化细胞贴壁性和生长稳定性。