大鼠原代肾小管上皮细胞

大鼠原代肾小管上皮细胞（Rat Primary Renal Tubular Epithelial Cells, RTECs）是从健康大鼠的肾组织中提取，主要来源于肾小管这一细长的上皮性结构，包含近端小管、髓袢和远端小管，各部分在结构和功能上有所不同。近端小管负责重吸收葡萄糖和氨基酸，远端小管则参与电解质和酸碱平衡的调节。

肾小管上皮细胞在重吸收原尿中的营养物质和排泄非营养性物质方面发挥关键作用，还能分泌炎症介质（如细胞因子、趋化因子），参与肾脏免疫反应，表达IL-2受体和MHC II类分子，涉及肾免疫损伤的发生。大鼠原代肾小管上皮细胞广泛用于肾脏疾病机制研究、药物筛选和毒理学研究，是研究肾间质纤维化及其他肾脏病变的重要体外模型。

大鼠原代肾小管上皮细胞特性特征

肾小管上皮细胞表达多种上皮细胞特异性标志物：

• 角蛋白（CK-18）：用于确认其上皮细胞身份。

• Na⁺/K⁺-ATP酶：参与电解质的重吸收。

• 水通道蛋白（AQP1）：在水的重吸收中起重要作用。

表达与肾功能相关的基因，如：

• SGLT2：负责葡萄糖的重吸收。

• NHE3：参与钠离子的重吸收。

• ACE（血管紧张素转化酶）：与肾脏内分泌功能相关。

表达特征

• 重吸收功能：大鼠原代肾小管细胞能够重吸收原尿中的几乎全部葡萄糖和氨基酸，显示出其在维持体内代谢平衡中的重要作用。

• 排泄功能：肾小管上皮细胞能够排泄非营养物质进入终尿，例如尿素和肌酐等废物。

• 炎症介质分泌：肾小管细胞能分泌多种炎症介质，如细胞因子和趋化因子（例如IL-8），参与急性炎症反应，并在肾免疫损伤中发挥作用。

• 应对环境变化：肾小管上皮细胞对缺血、感染和毒物等环境变化敏感，能够通过调节相关基因的表达来适应不同的生理状态

大鼠原代肾小管上皮细胞参数表

大鼠原代肾小管上皮细胞培养教程

收到原代肾小管上皮细胞后的处理

• 收到原代肾小管上皮细胞时，检查培养瓶的密封性、培养液是否浑浊或漏液。
  

• 若是冻存的原代肾小管上皮细胞，需确认干冰是否完全挥发，冻存管是否破损，以保证细胞的存活率。

• 活细胞：收到T-25培养瓶中的原代肾小管上皮细胞后，用75%酒精消毒瓶表面，放入培养箱静置2-3小时。
  

• 冻存细胞：如为冻存的原代肾小管上皮细胞，需尽快转入液氮或-80℃冰箱中保存，准备进行复苏操作。

原代肾小管上皮细胞的复苏

• 配制适合原代肾小管上皮细胞生长的完全培养基，包括基础培养基（如DMEM/F12）、10%胎牛血清（FBS）和1%双抗。
  

• 预热培养基：在37℃水浴中预热5 ml完全培养基。
  

• 化冻细胞：快速从液氮或-80℃冰箱取出冻存的原代肾小管上皮细胞，放入37℃水浴中摇晃约1分钟至完全化冻。

• 离心：将化冻的原代肾小管上皮细胞悬液加入5 ml预热培养基中，置于15 ml离心管中，1000 rpm离心5分钟。

• 重悬细胞：弃去上清，用2 ml完全培养基重悬原代肾小管上皮细胞，将其接种于T-25培养瓶中培养。

• 细胞培养：将原代肾小管上皮细胞放入37℃、5% CO₂培养箱中培养，24小时后更换新鲜培养基。

原代肾小管上皮细胞的传代

• 当原代肾小管上皮细胞生长至80%-90%汇合时，可以进行传代。
  

• 吸弃旧的培养基，用1 ml无菌PBS轻柔地洗涤原代肾小管上皮细胞。
  

• 加入1 ml 0.25%胰酶，在37℃孵育1-2分钟，观察原代肾小管上皮细胞变圆后，加入1 ml完全培养基终止消化。

• 轻轻拍打瓶壁使细胞脱落，形成均匀的细胞悬液。

• 收集悬液至离心管中，1000 rpm离心5分钟，弃去上清。

• 将沉淀的原代肾小管上皮细胞重悬于适量完全培养基中，分成新培养瓶继续培养。

原代肾小管上皮细胞的冻存

• 按传代方法收集原代肾小管上皮细胞，并计数。
  

• 配制冷冻保护液（90% FBS + 10% DMSO），以保护原代肾小管上皮细胞在冻存过程中不受损伤。

• 将原代肾小管上皮细胞悬浮于冷冻保护液中，分装于冻存管中，每管约1-5×10⁶ cells/ml。

• 置于-80℃冰箱中逐渐降温，然后转移至液氮中长期保存。

注意事项

• 无菌操作：培养原代肾小管上皮细胞时，需在生物安全柜中进行，确保无菌。

• 培养基更换：及时更换原代肾小管上皮细胞的培养基，每2-3天更换一次，以保持良好状态。

• 传代频率：根据原代肾小管上皮细胞的生长速度合理安排传代，避免过度消化和稀释。