
Super Tube细胞(犬肾上皮细胞)
- 来源:正常肾
- 细胞特征:贴壁细胞 , 上皮细胞样
- 培养基:DMEM/F12+0.05mM NEAA+10% FBS+1% P/S
- 其他:Super Tube细胞的cAMP检测水平显著低于原始MDCK细胞
Super Tube细胞系是源自犬肾的上皮样细胞株,最初从表观健康的成年雌性可卡犬的肾脏组织中分离,并通过从MDCK(Madin-Darby Canine Kidney)细胞株中克隆获得。Super Tube细胞在培养过程中表现出上皮样形态,并且在高细胞密度条件下,能够快速形成小管结构(如在24孔板中每孔接种7×10^5个细胞,3天内形成明显的小管)。在培养时,Super Tube细胞需要频繁更换培养基(每天两次),以提供充足的养分来支持其小管的形成。Super Tube细胞常用于研究肾脏功能、肾小管形成以及相关疾病模型、在药物筛选、细胞生物学研究等领域也有着广泛应用。
Super Tube细胞特性特征
cAMP水平:与原始MDCK细胞株相比,Super Tube细胞的cAMP检测水平显著降低。
腺苷环化酶活性:在毛喉素刺激下,Super Tube细胞的腺苷环化酶活性低于MDCK和Super Dome细胞。
跨上皮电阻:Super Tube细胞跨上皮电阻也低于MDCK和Super Dome细胞系,表明其屏障功能相对较弱。
与MDCK和其他相关细胞株相比,Super Tube细胞具有较低的腺苷环化酶活性,且在毛喉素刺激下cAMP水平升高较为有限。
Super Tube细胞参数表
细胞名称 | Super Tube细胞(犬肾上皮细胞) |
细胞别称 | MDCK supertube; SuperTube |
种属来源 | 狗 |
年龄性别 | 雌;成年 |
组织来源 | 正常肾 |
细胞形态 | 上皮细胞样;贴壁生长 |
生长特性 | 贴壁细胞;能形成小管 |
生物安全等级 | BSL1 |
包装规格 | T25瓶或1mL冻存管 |
推荐换液频率 | 2~3次/周;维持细胞生长和小管形成 |
传代比例 | 1:3 - 1:4 |
培养基类型 | DMEM/F12 + 0.05mM NEAA + 10% FBS + 1% P/S |
培养条件 | 温度:37℃;气相:空气95%;CO₂ 5% |
冻存条件 | 冻存液:55% 基础培养基 + 40% FBS + 5% DMSO;液氮储存 |
小管形成能力 | 每孔接种7×10^5细胞,3天内形成小管 |
cAMP水平 | 显著低于MDCK;在毛喉素刺激下腺苷环化酶活性也较低 |
跨上皮电阻 | 相比Super Dome和MDCK细胞较低 |
支原体检测 | 无 |
培养教程
Super Tube细胞(犬肾上皮细胞)培养教程
传代步骤
当细胞达到80%-90%汇合度时,进行传代。
使用不含钙、镁的PBS缓冲液清洗细胞1-2次,去除残留的血清成分,以提高胰酶消化效率。
加入0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA混合液(2 ml),在37℃下消化1-2分钟。
观察细胞形态,待细胞变圆、轻微脱落时,立即终止消化。
加入6-8 ml含10% FBS的新鲜培养基,终止消化,轻轻吹打混匀。
将细胞悬液收集到离心管中,以1000 RPM离心4分钟,去除上清。
用1-2 ml新鲜培养基重悬细胞。
以1:3至1:4的比例,将细胞分瓶接种到新的培养瓶中。
冻存步骤
配制冻存液,成分包括:55%基础培养基、40%胎牛血清和5%二甲基亚砜(DMSO),其中DMSO作为细胞保护剂,防止冰晶形成。
将细胞重悬于冻存液中,密度不低于1×10^6 cells/ml。
每支冻存管加入1 ml细胞悬液,并做好标签标识。
将冻存管放入程序降温盒(如Mr. Frosty™),以每分钟-1℃的速率降温,置于-80℃冰箱中预冻至少2小时。
最后将冻存管转入液氮罐中长期保存,确保细胞活性和稳定性。
注意事项
无菌操作:所有培养和传代操作应在无菌条件下进行,使用无菌移液器、培养瓶和培养基,防止细胞污染。
细胞状态监测:定期观察细胞形态和生长状态,若出现污染或异常,应及时更换培养基或重新复苏细胞。
冻存细胞复苏:从液氮中取出的冻存管需迅速置于37℃水浴中解冻,待细胞完全溶解后,立即加入10 ml新鲜培养基,离心去除DMSO,再将细胞重新培养。