MDCK细胞（NBL-2细胞犬肾细胞）

MDCK（Madin-Darby Canine Kidney）细胞系最早由S.H. Madin和N.B. Darby于1958年从一只成年雌性美国可卡犬的肾脏组织中分离。MDCK细胞来源于犬肾脏的上皮细胞，最初用于研究病毒感染的机制，尤其是在流感病毒等病原体的研究中表现出重要的应用价值。

MDCK [NBL-2] 细胞系展现了显著的上皮细胞特征，具有较强的贴壁生长能力。MDCK [NBL-2] 细胞的一个显著特点是其在工业生物技术和毒理学研究中的应用潜力，尤其在药物筛选和毒性评估中具有重要的应用价值。因其易于培养且对多种病毒具有敏感性，MDCK [NBL-2] 也常用于病毒的扩增和生产，成为转染与基因表达研究的重要工具。

MDCK细胞（NBL-2细胞犬肾细胞）特性特征

• 形态：MDCK细胞呈多边形或纺锤形，能够在培养基中形成紧密的单层结构。

• 模态染色体数目：MDCK细胞的模态染色体数目为78，范围在77到80之间，属于超二倍体。

• 染色体分布：染色体数目呈双峰分布，且大多数传播中存在一条正常的X染色体。

• 角蛋白表达：MDCK细胞通过角蛋白免疫过氧化物酶染色呈阳性。

• 病毒易感性：MDCK细胞系对多种病毒具有敏感性，包括人柯萨奇病毒B5、腺相关病毒4、痘苗病毒；水疱性口炎病毒；腺相关病毒5；人柯萨奇病毒B3；人柯萨奇病毒B4；人脊髓灰质炎病毒2型。

• 流体运输：MDCK细胞能够形成单层上皮结构，并具备流体运输功能，这使其成为研究肾小管功能的重要模型。
  

• 自组织能力：在三维培养条件下，MDCK细胞能够自我组织形成空心球结构，展现出良好的生物学特性

MDCK细胞参数表

MDCK细胞（NBL-2细胞犬肾细胞）培养教程

细胞复苏

• 将冻存的MDCK细胞从液氮罐中取出，并迅速放入37℃水浴中解冻。

• 细胞解冻后，立即将MDCK细胞悬液加入预制的完全培养基中，混匀后进行离心（1000 rpm，5分钟），去除冷冻保存液。

• 弃去上清液后，使用新鲜的完全培养基重悬MDCK细胞，并将其转移至培养瓶中。

• 将重悬后的MDCK细胞接种至培养瓶中，推荐的接种密度为每毫升培养基中接种1-5 × 10^5个细胞。

• 将培养瓶放置于37℃、5% CO₂的培养箱中培养，确保MDCK细胞在最佳生长条件下维持。

细胞传代

• 当MDCK细胞生长至80%-90%密度时进行传代。

• 用PBS缓冲液清洗细胞，去除残余的培养基及死细胞。

• 使用消化液（如胰酶和EDTA）处理细胞，通常需要1-3分钟，观察到细胞逐渐变圆后停止消化。

• 加入等体积的完全培养基，轻轻吹打使MDCK细胞分散。

• 离心（1000 rpm，5分钟），去除上清液后，重悬细胞并进行传代，常用的传代比例为1:2至1:3。

细胞冻存

• MDCK细胞在健康生长状态且达到适当密度时可进行冻存。

• 将10% DMSO与10% FBS混合，按照1:1比例加入细胞悬液中作为冷冻保护液。

• 将混合液分装至冻存管中，并逐步将细胞悬液降温至-80℃，或直接转移至液氮罐中进行长期保存。

注意事项

• 无菌操作：整个培养过程必须在无菌环境下进行，所有器材和耗材都要严格消毒，避免污染。

• 培养基更换：每2-3天更换一次培养基，保持MDCK细胞在最佳生长状态。

• 细胞生长监控：定期观察MDCK细胞形态，确认其处于健康状态，避免细胞过度拥挤或处于应激状态。

• 传代比例：初次传代时建议采用较小的传代比例（如1:2），避免细胞过度稀释，保证其生长速度。

• 冻存与复苏：MDCK细胞冻存时应确保冷冻保护液充分混匀，避免冻存过程中细胞受损。复苏时应尽量减少解冻时间，避免细胞受到热冲击。