
15P1细胞(小鼠睾丸上皮细胞) (暂不提供)
- 来源:睾丸
- 细胞特征:贴壁细胞,上皮细胞样
- 培养基:DMEM+10% FBS+1% P/S
- 其他:15P1细胞表现出支持细胞(Sertoli细胞)和精原细胞的特性,可用于研究睾丸上皮细胞的生物学过程
15P-1小鼠睾丸上皮细胞系是从一种在生精上皮中表达多瘤病毒大T蛋白(PyLT)的转基因小鼠的睾丸细胞中建立。15P1细胞表现出塞尔托利细胞的特征,包括威尔姆斯瘤(WT1)和斯蒂尔基因的转录。
在与二倍体前生殖细胞共培养时,15P1细胞能够支持这些细胞的减数分裂及其后续分化,最终形成表达精蛋白(Prm-1)基因的单倍体精子细胞。在首次减数分裂开始之前,从9天大的未成熟小鼠中提取的睾丸细胞通过与15P-1细胞共培养,能够形成具有圆形精子细胞形态的单倍体细胞四分体,并启动精蛋白基因的转录。
15P1细胞特性特征
15P1细胞系表现出支持细胞(Sertoli细胞)的特征,能够支持生殖细胞的发育。
15P1细胞表达Wilms肿瘤(WT1)基因和Steel基因,这些基因与生殖细胞的发育和支持功能相关。
15P1细胞系展示出吞噬活性,能够吞噬乳胶颗粒和清除死亡细胞。与生殖细胞的相互作用可以增强其吞噬能力。
15P1细胞分泌具有广谱抗菌活性的蛋白酶敏感物质。在富含圆形精子细胞和神经生长因子的培养基中,其抗菌活性可提高10倍至50倍。
15P1细胞表达KL蛋白(Kit受体的配体),这一蛋白在支持细胞和15P1细胞中均有表达,确认了其Sertoli细胞的特性。
15P1细胞能够支持二倍体减数分裂前生殖细胞的减数分裂及其后续分化,形成表达精蛋白(Prm-1)基因的单倍体精子细胞。
15P1细胞参数表
细胞名称 | 15P1细胞(小鼠睾丸上皮细胞) |
别称 | 15p-1; |
来源 | 雄性C57BL/6与DBA/2杂交转基因小鼠的睾丸细胞 |
供体信息 | 雄性,6月龄;睾丸组织 |
细胞类型 | Sertoli细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生物安全等级 | 2 |
细胞状态 | 贴壁生长,适用于3D细胞培养 |
培养基类型 | DMEM + 10% FBS + 1% P/S |
培养基pH值 | 7.2 - 7.4 |
培养条件 | 37℃,5% CO₂,饱和湿度 |
换液周期 | 每2-3天 |
传代比例 | 1:2 - 1:4(视细胞生长速度及密度决定) |
传代方法 | 胰酶消化法 |
倍增时间 | 24-48小时(视培养条件和细胞状态而定) |
抗菌活性 | 具有广谱抗菌活性,培养基活性可提高10-50倍 |
吞噬活性 | 能够吞噬乳胶颗粒和清除死亡细胞 |
KL蛋白表达 | 表达Kit受体的配体 |
细胞增殖能力 | 在适宜条件下可持续增殖 |
细胞凋亡特性 | 可用于研究细胞凋亡机制 |
细胞迁移能力 | 具备一定的迁移能力,可用于相关研究 |
生殖细胞支持 | 能够支持二倍体减数分裂前生殖细胞的减数分裂及其后续分化 |
精子发生支持 | 支持精原细胞分化为表达精蛋白(Prm-1)基因的单倍体精子细胞 |
细胞间相互作用 | 与生殖细胞的相互作用增强吞噬活性 |
研究领域 | 生殖生物学、细胞生物学、发育生物学 |
实验模型 | 用于研究睾丸上皮细胞的生物学过程及其在生殖细胞发育中的作用 |
培养教程
15P1小鼠睾丸上皮细胞培养教程
细胞复苏
配制好复苏所需的完全培养基:DMEM-H(高糖) + 10% FBS + 1% P/S(青霉素-链霉素)。
将冻存的15P1细胞管迅速转移至37℃水浴中解冻,避免长时间暴露在常温下。
解冻完成后,立即将15P1细胞悬液(约1 mL)加入到含有4 mL预热培养基的离心管中,轻轻混匀。
在1000 RPM下离心4分钟,去除上清液以清除DMSO和其他冻存保护剂。
向沉淀中加入1-2 mL新鲜培养基,轻柔吹打以均匀分散15P1细胞,然后将细胞转移至适当大小的培养瓶中进行培养。
细胞传代
传代时,先吸干培养瓶中的培养基。
向培养瓶中加入3-4 mL PBS(常温),轻轻摇动以润洗15P1细胞,随后吸走PBS。
加入1 mL胰酶覆盖细胞层,轻轻晃动培养瓶以均匀分布胰酶。将培养瓶放入37℃培养箱中,观察细胞间隙变大但未完全脱落时,立即停止消化。
添加2-3 mL完全培养基终止消化过程,并轻轻混匀细胞。
在900 RPM下离心3-5分钟,弃去上清液。加入新鲜培养基重悬15P1细胞,然后按所需比例分装到新的培养瓶中。
加入适量的完全培养基,置于培养箱中继续培养15P1细胞。
注意事项
无菌操作:始终保持无菌操作,避免15P1细胞受到污染。
消化时间:严格控制胰酶消化时间,不同品牌的胰酶效果可能不同,需根据经验进行调整。
细胞状态监测:定期检查15P1细胞的形态和生长状况,确保其健康生长。
细胞冻存
冻存液制备:使用55%基础培养基、40% FBS和5% DMSO的冻存液来保存15P1细胞。
冻存步骤:将15P1细胞重悬于冻存液中,并分装至冻存管中。在-80℃冷冻过夜后,转移至液氮中长期保存。