ST细胞（猪睾丸细胞系）

ST细胞系（猪睾丸细胞系）是一种从猪的睾丸组织中分离出的成纤维样细胞，由McClurkin等人于1960年建立。ST细胞系源自80-90日的猪龄，经过多次传代培育后成功稳定为常用的细胞系。ST细胞为实验室贴壁生长，具有上皮样特性，广泛筛选猪病毒的增殖和分离，尤其是研究猪细小病毒（PPV）、传染性性胃肠炎病毒（TGE）及猪破坏病毒等指标时表现出良好的感染和抑制能力。ST细胞系重要的病毒模型，常用于实验室中的病毒作为增殖、分离与检测。

ST细胞特性特征

• 病毒敏感性：ST细胞对多种猪病毒具有高度敏感性，包括猪小病毒（PPV）、传染性胃肠炎病毒（TGE）、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒等。这使得ST细胞成为病毒分离和增殖的理想宿主。
  

• 基因表达：ST细胞在感染后能够表达与病毒复制相关的多种基因。

• 基因组特征：ST细胞的基因组包含能够支持其对多种病毒感染的遗传背景。研究表明，这些细胞系可能具备某些特定的受体或辅助因子，促进病毒的附着和进入。
  

• 适应性：经过长期培养，ST细胞表现出对环境变化的适应能力，能够在不同的培养条件下稳定生长。

• 疫苗生产：ST细胞系符合世界卫生组织（WHO）关于用于生物制品的传代细胞的规程要求，可以用于生产猪瘟、猪流感等疫苗

ST细胞（猪睾丸细胞系）参数表

ST猪睾丸细胞系培养教程

收到ST细胞后的处理

• 收到ST细胞后，首先检查运输包装是否完整，观察培养瓶内是否存在漏液、浑浊或异常现象。
  

• 将T25培养瓶中的ST细胞置于37℃培养箱中，静置2-3小时，使ST细胞逐渐恢复活力。

• 观察ST细胞状态，确认贴壁情况与密度。

ST细胞复苏步骤

• 从液氮罐中取出ST细胞冻存管，迅速放入37℃的水浴中，持续摇动解冻，约1-2分钟即可完全解冻。
  

• 解冻后的ST细胞立即加入4mL预温的完全培养基（含10%FBS的DMEM培养基），轻轻混匀。
  

• 以1000 RPM离心4分钟，取出上清液，保留沉淀的ST细胞。

• 用1-2 mL完全培养基重悬ST细胞，将细胞悬液加入事先准备好的T25培养瓶或10 cm培养皿中，补充8 mL培养基。
  

• 将ST细胞置于37℃、5% CO2培养箱中过夜培养。

• 第二天观察ST细胞贴壁情况，如细胞贴壁良好，废弃去上清并更换新鲜细胞。
  

ST细胞起源

• 当ST细胞密度达到80%-90%时，即可进行传代操作。通常每2-3天检查细胞一次密度。
  

• 弃去培养基后，用PBS清洗1-2次，以消除残余血清对消化的影响。
  

• 加入1 mL胰蛋白酶-EDTA消化液（0.25%胰蛋白酶，0.53 mM EDTA），在37℃培养箱中消化1-2分钟。观察ST细胞变圆并逐渐脱落时，取出培养瓶。

• 2-3 mL完全培养基和胰酶消化作用，并轻轻吹打ST细胞，加入完全分散。
  

• 以1000转离心4分钟，弃去上清液，保留细胞沉淀。

• 用1-2 mL新鲜培养基重悬ST细胞，并按1:2或1:3的比例分配至新的T25培养瓶中，补充8-10 mL完全培养基，继续培养。
  

ST细胞冻存

• 冻存时机：在ST细胞状态良好、密度达到70%-80%时进行冻存操作。

• 弃去培养基，用PBS清洗ST细胞，再加入1 mL胰酶消化细胞至变圆、脱落状态。
  

• 加入1 mL培养基中充分消化反应。

• 以1000转离心4分钟，从而达到上清液。
  

• 用冷冻保护液（90%胎牛血清+10%DMSO）重悬ST细胞，调整浓度为1×10^6细胞/mL。

• 将ST细胞悬液分装至冻存管中，每管1 mL。
  

• 将冻存管装载到程序吸取盒中，放入-80℃冰箱中吸取至少2小时，再转移至液氮罐中长期保存。

ST细胞培养注意事项

• 无菌操作：所有操作应在无菌环境下进行，避免ST细胞感染细菌、真菌或支原体感染。

• 培养基选择：建议使用含10%胎牛血清的DMEM培养基，并定期检查ST细胞的生长状态，及时更换宿舍。

• 细胞观察：定期使用显微镜观察ST细胞形态，确保细胞健康且生长良好。如发现污染或异常，及时处理并更换。

• 传代与冻存频率：建议每2-3次传代进行一次ST细胞冻存，以保持细胞系的稳定性并避免细胞老化。