
PT-K75细胞(猪鼻甲黏膜成纤维细胞)
- 来源:鼻
- 细胞特征:贴壁细胞,成纤维细胞样
- 培养基:DMEM+10%FBS+1%P/S
- 其他:PT-K75细胞广泛应用于猪巨细胞病毒(CMV)的繁殖和感染机制研究。通过与CMV进行1:1共培养,PT-K75细胞系为观察病毒的生命周期及其对宿主细胞的影响提供了理想平台
PT-K75猪鼻甲黏膜成纤维细胞是一种来源于新生仔猪鼻甲黏膜的成纤维细胞系,具备良好的贴壁生长能力,呈梭形成纤维细胞样。PT-K75细胞系属于生物安全等级1级(ATCC编号:CRL-2528),可在一般实验室环境中操作,主要应用于生物医学研究,尤其是在猪巨细胞病毒(CMV)的感染和繁殖研究中。
PT-K75细胞通过与CMV进行1:1共培养,为研究CMV的感染机制和病毒繁殖提供了理想的体外模型,在研究与猪呼吸道相关的疾病机制、炎症反应及抗病毒药物筛选中也具有重要的实验应用价值。
PT-K75细胞参数表
细胞名称 | PT-K75细胞(猪鼻甲黏膜成纤维细胞) |
细胞别称 | PTK75 |
种属来源 | 猪(Sus scrofa) |
年龄性别 | 新生仔猪 |
组织来源 | 鼻部粘膜 |
细胞形态 | 成纤维细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
生物安全等级 | 1级 |
细胞规格 | 1×10^6 cells/T25培养瓶或1 mL冻存管 |
支原体检测 | 无 |
病原体检测 | HIV、乙型肝炎、丙型肝炎均为阴性 |
STR鉴定 | 未提供 |
培养基 | DMEM + 10% FBS + 1% 双抗 |
培养条件 | 气相:95%空气 + 5%二氧化碳;温度:37℃ |
倍增时间 | 未提供 |
冻存液 | 无血清冻存液 |
冻存条件 | 液氮储存 |
运输方式 | 干冰运输或复苏发货 |
保存条件 | 液氮储存 |
操作安全性 | 在二级生物安全台内操作,注意防护。 |
用途 | 仅供科研使用 |
培养教程
PT-K75猪鼻甲黏膜成纤维细胞培养教程
细胞复苏
解冻:将PT-K75细胞的冻存管从液氮或-80℃冰箱中取出,迅速放入37℃水浴中解冻,轻轻摇动,约1-2分钟完全解冻。
初步处理:解冻后的PT-K75细胞转移至15 mL离心管,加入4-6 mL预热的完全培养基,轻轻混匀。
离心:以1000 RPM离心3-5分钟,去除上清液,保留PT-K75细胞沉淀。
重悬:用1-2 mL完全培养基重悬PT-K75细胞,确保细胞分散均匀。
接种:将重悬的PT-K75细胞接种于T25培养瓶中,加入6-8 mL完全培养基,并放入37℃、5% CO₂培养箱中过夜培养。
观察生长情况:第二天通过显微镜检查PT-K75细胞的贴壁及增殖情况,确保其健康状态。
细胞传代
传代时机:当PT-K75细胞生长至80%-90%汇合度时,可进行传代。
洗涤:吸弃旧培养基,用无菌PBS轻轻洗涤PT-K75细胞,以去除残余培养基和血清。
消化细胞:加入1 mL 0.25%胰酶-EDTA溶液,37℃孵育1-2分钟,观察PT-K75细胞是否变圆脱落。
终止消化:加入3-4 mL含10% FBS的完全培养基,终止胰酶消化,轻拍培养瓶底部使PT-K75细胞完全脱落。
收集与重悬:将PT-K75细胞悬液转移至15 mL离心管,以1000 RPM离心3-5分钟,弃去上清后用完全培养基重悬细胞。
重新接种:根据需要按1:2至1:3比例将PT-K75细胞分瓶,加入6-8 mL新鲜培养基,确保细胞分布均匀。
细胞冻存
收集细胞:按照传代步骤收集PT-K75细胞沉淀,计数后调整细胞浓度为1×10^6个/mL。
制备冻存液:使用预冷的冻存液(90%完全培养基 + 10% DMSO)重悬PT-K75细胞。
分装与冷冻:将PT-K75细胞分装于1.2 mL冻存管,放入程序降温盒中,-80℃过夜后转存至液氮中长期保存。
注意事项
运输检查:收到PT-K75细胞后,需检查运输状态,若有异常,应及时与供应商联系。
培养基更新:勿重复使用运输过程中使用的培养基,务必使用新鲜完全培养基培养PT-K75细胞。
传代建议:首次传代按1:2比例进行,以确保PT-K75细胞的稳定增殖。
相关资料
STR鉴定及相关
参考文献
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