猪骨骼肌卫星细胞（永生化）

猪骨骼肌卫星细胞（永生化）是来源于猪正常骨骼肌组织的一类成肌干细胞，它们是由成肌细胞(Myoblasts)融合而来的多核细胞。猪骨骼肌卫星细胞形态表现为贴壁生长的梭形或不规则细胞，具有显著的成肌分化潜能。骨骼肌卫星细胞天然位于肌纤维的肌膜与基膜之间，平时多处于静息状态，在肌肉损伤或生理刺激下会被激活，进入增殖并向成肌细胞方向分化，最终可与已有的肌纤维融合，完成肌肉组织的修复和再生。永生化细胞株的建立通常借助慢病毒载体导入SV40基因，从而延长细胞寿命并保持成肌特性，为长期研究提供稳定模型。

在信号通路调控方面，骨骼肌分化过程涉及多条关键信号级联，包括phosphatidylinositol 3-kinase、calcineurin、STAT3与MAPK等，它们共同参与肌肉发生及分化调节。猪骨骼肌卫星细胞因具备良好的成肌谱系潜能，广泛应用于肌肉细胞分化机制研究、信号通路解析、再生医学探索等领域。同时，猪骨骼肌卫星细胞在畜牧业生物工程与细胞培养肉开发中也具有重要的潜在应用价值，为基础研究与应用转化之间提供了桥梁。

猪骨骼肌卫星细胞多取自猪的骨骼肌组织，常见采样部位为后腿或背部的长肌区域，因其细胞数量丰富、活性较高，常作为分离与培养的理想来源。猪骨骼肌细胞作为体外模型不仅适合研究骨骼肌的再生与分化，还为探索肉类替代品研发提供了实验基础。

猪骨骼肌卫星细胞特性特征

• 猪骨骼肌卫星细胞形态为长梭状，贴壁生长，纯度高，通常通过肌动蛋白（α-actin）免疫荧光染色确认，纯度常达90%以上。

• 具有自我更新和多能分化能力，能够增殖并分化为成熟肌纤维。

• 经永生化处理（如SV40基因转染）后，细胞可以突破正常细胞周期限制，提高增殖能力，便于长期稳定培养。

• 猪骨骼肌卫星细胞适用于骨骼肌细胞分化机制研究、肌肉组织工程及细胞培养肉等领域。

• 猪骨骼肌卫星细胞表达成肌细胞标志性蛋白如肌动蛋白（α-actin），显示其肌肉细胞谱系身份。

• 涉及多个细胞信号通路，如phosphatidylinositol 3-kinase、calcineurin、STAT3、MAPK等，调控细胞的增殖与分化过程。

• 细胞内肌蛋白的表达反映了其成肌分化过程，为骨骼肌卫星细胞的功能基础。

• 猪骨骼肌卫星细胞含有永生化基因，如SV40大T抗原基因，促进细胞免疫逃逸和持续增殖能力。

• 基因表达谱中富含成肌相关基因及调节肌细胞分化的转录因子，支持骨骼肌形成及再生。

• 探索如SELW基因等对骨骼肌卫星细胞分化的调控，也是研究重点之一。

猪骨骼肌卫星细胞参数表

猪骨骼肌卫星细胞（永生化）培养教程

细胞复苏（Thawing）

• 从液氮罐取出冻存管，迅速放入37℃水浴中，轻轻摇晃1–2分钟，直至猪骨骼肌细胞完全解冻。

• 取出冻存管，用75%乙醇擦拭外壁后转入超净工作台。

• 将细胞缓慢加入10倍体积的预温完全培养基中，轻轻混匀。

• 以1000 rpm离心5分钟，去除含DMSO的冻存液，减少对猪骨骼肌细胞的毒性影响。

• 弃去上清液，加入新鲜培养基重悬细胞。

• 接种至培养瓶或培养皿，放入37℃、5% CO₂培养箱中培养。

• 复苏初期的猪骨骼肌细胞需要24小时适应环境，避免频繁更换培养液。

细胞传代（Subculture）

• 当猪骨骼肌细胞生长至70–80%融合时进行传代。

• 弃去培养基，用PBS轻轻冲洗1–2次。

• 加入0.25%胰酶，37℃孵育1–3分钟，显微镜下观察猪骨骼肌细胞逐渐变圆松动。

• 轻敲瓶底促使细胞脱落，加入含血清培养基终止消化。

• 收集悬液并轻轻吹打分散细胞。

• 按1:2或1:3比例重新接种至新瓶，继续在37℃、5% CO₂条件下培养。

• 传代时注意避免过度消化，以保证猪骨骼肌细胞活力和正常形态。

细胞冻存（Cryopreservation）

• 选择处于对数生长期、融合度约90%的健康猪骨骼肌细胞。

• 胰酶消化并离心收集细胞沉淀。

• 使用冻存液（90%培养基 + 10% DMSO，或无血清冻存液）重悬细胞。

• 调整密度至1–5 × 10⁶ 个猪骨骼肌细胞/mL。

• 将悬液分装入冻存管并标注信息。

• 置于-80℃程序降温盒中（约1℃/分钟速率）冷冻24小时。

• 转移至液氮罐中长期保存。

培养注意事项

• 猪骨骼肌细胞复苏后应给予足够恢复时间，避免频繁操作。

• 传代过程中消化时间需控制在适宜范围，保证细胞状态。

• 冻存时选用高质量冻存液，避免多次冻融造成损伤。

• 全程操作需保持无菌，定期观察猪骨骼肌细胞形态，防止污染。