
MARC145细胞(非洲绿猴胚胎肾细胞)
- 来源:胚胎
- 细胞特征:贴壁细胞 , 上皮细胞样
- 培养基:DMEM+10% FBS+1% P/S
- 其他:病毒敏感性:对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)高度敏感,也可用于鸡传染性支气管炎病毒(IBV)和猪小病毒(PPV)的体外增殖
MARC145细胞系是从非洲绿猴(Cercopithecus aethiops)的胚胎肾上皮细胞中衍生出来的,为母细胞系MA-104的克隆细胞,MA-104细胞系同样来源于非洲绿猴的肾组织,而非恒河猴。MARC145细胞具备稳定的上皮样形态,能够在体外连续培养并具有快速增殖的特性。MARC145细胞系因对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)高度敏感而受到广泛应用,尤其适合用于PRRSV的感染机制研究和疫苗生产。
MARC145细胞特性特征
MARC145细胞对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)具有高度敏感性,是该病毒研究的重要模型。
MARC145细胞在接种PRRSV后,通常在24至48小时内开始出现病变,72至96小时达到80%的病变率。
MARC145细胞系表达多种与病毒感染相关的受体和辅助因子,这使其成为研究病毒感染机制的理想模型。
在无血清培养条件下,MARC-145细胞可以使用含有胰岛素样生长因子、表皮生长因子和成纤维生长因子的培养基,以促进其快速增殖并降低动物源成分的含量,从而提高疫苗的安全性。
MARC-145细胞广泛应用于病毒学研究、疫苗开发以及药物筛选等领域
MARC145细胞参数表
细胞名称 | MARC145细胞(非洲绿猴胚胎肾细胞) |
细胞别称 | Marc-145; MARC 145; Marc 145; MARC145; Marc145; Meat Animal Research Center-145 |
细胞来源 | 非洲绿猴(Cercopithecus aethiops)胚胎肾细胞 |
母细胞系 | MA-104 |
细胞类型 | 上皮样细胞 |
传代特性 | 可连续传代 |
细胞形态 | 扁平或多边形,贴壁生长 |
感染敏感性 | 对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)高度敏感 |
适用病毒 | PRRSV、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、猪小病毒(PPV) |
培养基 | DMEM+10% FBS+1% P/S |
培养环境 | 气相:空气,95%;CO2,5% 温度:37℃ |
pH值 | 7.0 - 7.3(最佳7.2) |
传代比例 | 通常为1:2或1:3 |
培养时间 | 通常48小时后可观察到细胞单层形成 |
冻存液 | 生长培养基 + 10% DMSO |
冻存温度 | -80℃(短期),液氮(长期) |
生长模式 | 贴壁生长 |
最大细胞密度 | 在生物反应器中可达8×10^6 cells/mL |
无血清培养基成分 | 胰岛素样生长因子 5μg/mL 表皮生长因子 10μg/mL 成纤维生长因子 8μg/mL 转铁蛋白 15μg/mL 亚硒酸钠 25μg/mL 小麦蛋白酶解物 4mg/mL 酶解明胶溶液 2%体积百分比 乙醇胺 15μg/mL |
检测污染 | 定期检查支原体等污染 |
培养注意事项 | 确保无支原体感染,及时传代,避免细胞老化 |
培养教程
MARC145非洲绿猴胚胎肾细胞培养教程
MARC145细胞复苏
将含MARC145细胞的冻存管在37℃水浴中迅速解冻,并轻轻摇晃至完全融化。
向解冻的MARC145细胞悬液中缓慢加入4mL DMEM培养基,混匀。
以1000 RPM离心4分钟,去除上清液。
补加1-2mL新鲜培养基并轻轻吹打,均匀悬浮MARC145细胞。
将细胞悬液转移至培养瓶,并置于37℃、5% CO₂培养箱中过夜培养,确保MARC145细胞附着和恢复。
MARC145细胞传代
当MARC145细胞生长至80%-90%汇合度时,弃去旧培养基,用PBS清洗细胞1-2次。
加入1mL胰蛋白酶消化液于培养瓶中,放置于37℃培养箱消化1-2分钟,密切观察MARC145细胞是否变圆、脱落。
加入适量新鲜培养基终止消化,并轻轻吹打,确保MARC145细胞完全分散。
以1000 RPM离心4分钟,弃去上清液。
重悬MARC145细胞于新鲜培养基中,按1:2的比例分瓶,并加入适量DMEM培养基,放入培养箱继续培养。
MARC145细胞冻存
在MARC145细胞状态良好时,将培养基弃去,用PBS清洗一次。
加入胰蛋白酶消化MARC145细胞,待细胞变圆时加入1mL含血清的培养基中止消化。
离心后去除上清液,重悬于适量的血清中,同时加入DMSO使终浓度为10%。
将MARC145细胞悬液分装于冻存管中,放入程序降温盒,置于-80℃冷冻2小时后转入液氮保存。
MARC145细胞培养注意事项
污染防控:应确保培养过程无支原体等污染,定期检查MARC145细胞的状态。
pH控制:MARC145细胞培养液pH值保持在7.0-7.3之间,最佳为7.2。
传代频率:当MARC145细胞达到适当密度(80%-90%汇合)时传代,避免长时间培养导致细胞状态老化。
异常情况:若MARC145细胞出现污染或状态异常,需及时处理并联系细胞供应商。
相关资料
STR鉴定及相关
参考文献
- 激流式生物反应器培养Marc-145细胞生产猪蓝耳病疫苗工艺研究 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会论文集》 2010年
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