
COS7细胞系(非洲绿猴SV40转化的肾细胞)
- 来源:肾;SV40转染
- 细胞特征:贴壁细胞 , 成纤维细胞样
- 培养基:DMEM+10% FBS+1% P/S
- 其他:COS7细胞能够持续表达SV40 T抗原,这使得它们在转染实验中表现出良好的转染效率。
COS-7细胞系是从非洲绿猴(Chlorocebus aethiops)肾脏细胞经过SV40病毒转化而得到的细胞系,其来源追溯至最初从非洲绿猴肾脏组织分离出的CV-1细胞。在1980年代初,研究人员通过将带有编码野生型T抗原并具有起始失活突变的SV40病毒转染到CV-1细胞中,成功建立了COS7细胞。COS7细胞携带了SV40基因组中全部早期区域的组成型拷贝,持续表达SV40 T抗原,具备增殖能力和高效的转染特性。
COS7细胞形态类似于成纤维细胞,在体外条件下具有显著的增殖优势,适用于长时间培养。COS7细胞广泛应用于多种生物学研究,包括基因表达、蛋白质生产及药物筛选等领域,是一种极为重要的细胞模型系统。
COS7细胞系特性特征
COS7细胞含有来自SV40基因组全部早期区域的组成型拷贝,这使得它们能够持续表达SV40 T抗原。
T抗原的表达使得COS7细胞具备了无限增殖的能力,并提高了其转染效率。
COS7细胞常用于研究基因表达和蛋白质功能,尤其是在类固醇生成和受体功能相关的研究中。
研究表明COS7细胞能够将激素如睾酮代谢为其他类固醇产物
COS7细胞系参数表
细胞名称 | COS7细胞系(非洲绿猴SV40转化的肾细胞) |
细胞别称 | Cos-7; COS7; CV-1 in Origin Simian-7 |
ATCC编号 | CRL-1651 |
种属来源 | 非洲绿猴(Chlorocebus aethiops) |
组织来源 | 肾脏 |
细胞形态 | 成纤维细胞样 |
生长特性 | 贴壁生长 |
基因表达情况 | T抗原 |
传代比例 | 1:2至1:4 |
传代周期 | 每2-3天一次 |
培养基组成 | 90% DMEM + 10% FBS + 1% P/S |
培养条件 | 温度:37℃;气相:95%空气 + 5% CO2 |
冻存条件 | 60%基础培养基 + 30% FBS + 10% DMSO,液氮储存 |
生物安全等级 | 2级 |
支原体检测 | 无支原体 |
质量检测 | 细菌、真菌检测均为阴性 |
细胞规格 | 1×10^6 cells/T25培养瓶 |
细胞代数限制 | 通常在10代以内 |
温度敏感性 | 支持40℃时温度敏感性A209病毒的复制 |
应用领域 | 基础生物学研究、药物筛选、毒性测试、基因表达研究等 |
培养教程
COS7非洲绿猴SV40转化的肾细胞培养教程
COS7细胞复苏步骤
取出COS7细胞冻存管:将冻存的COS7细胞从液氮罐中取出。
快速解冻:在37℃水浴中快速解冻1-2分钟,轻轻摇动冻存管,直到细胞完全融化。
将解冻后的COS7细胞悬液转移到离心管,加入4-6 mL预热的完全培养基,轻轻混匀。
以1000 RPM离心3-5分钟,去除上清液,减少DMSO对COS7细胞的毒性。
重悬COS7细胞:加入6-8 mL预热的完全培养基,将细胞轻轻吹打均匀。
接种培养:将重悬的COS7细胞移至培养瓶或培养皿,置于37℃、5% CO₂培养箱中培养。
COS7细胞传代
观察细胞密度:当COS7细胞密度达80%-90%时,即可进行传代。
弃去旧培养基,用无钙镁的PBS缓冲液清洗COS7细胞1-2次,以去除血清残留,防止胰蛋白酶消化过程受影响。
加入0.25%胰蛋白酶和0.53 mM EDTA的混合消化液(如T25瓶使用1-2 mL),在37℃下消化1-2分钟。
在显微镜下观察细胞是否变圆、脱落,迅速加入含10% FBS的培养基中和消化作用。
将消化后的COS7细胞转移到离心管,以500 g离心2分钟,弃去上清液。
加入适量培养基重悬细胞,根据实验需求进行细胞计数。
接种新培养瓶:按1:2至1:4的比例将COS7细胞接种至新培养瓶或培养皿中。
COS7细胞冻存
制备COS7细胞冻存液:使用90%胎牛血清和10% DMSO的混合液作为COS7细胞冻存液。
收集细胞:在冻存前将已传代的COS7细胞离心,去除上清液,加入冻存液并轻轻混匀。
分装与冷冻:将混匀的COS7细胞悬液分装至冻存管中,每管约1 mL。
将冻存管放入程序降温盒中,在-80℃环境下预冻一夜后,转入液氮中长期保存。
相关资料
STR鉴定及相关
参考文献
- SV40载体/COS7细胞稳定表达系统的建立与改进 《中国人民解放军军事医学科学院》 2002年
- 摘要:基于猴病毒40(SV40)载体在COS7细胞内的复制没有节制并对细胞具有致死性,长期以来S...
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