vero细胞（非洲绿猴肾细胞）

Vero细胞源自非洲绿猴（Chlorocebus sabaeus）的肾脏上皮细胞。1962年3月27日，日本千叶大学的安村美博首次从一只正常成年非洲绿猴的肾脏中分离出该细胞系。该名称“Vero”取自世界语，意指“绿色的肾脏”（Verda Reno），同时亦有“真相”之意。1964年6月15日，B. Shimizu博士将第93代Vero细胞系从千叶大学带至美国国立卫生研究院国家过敏和传染病研究所的热带病毒学实验室。

Vero细胞系表现为非整倍性且具有亚二倍体的染色体特点。其染色体数目异常，模式染色体数为58，约66%的细胞中可观察到这一数量。大部分细胞含有结构上异常的标记染色体，而A3、A4、B4和B5染色体的缺失现象尤为明显。染色体B2、B3和B7在部分细胞中会形成偶对，而B9、C1和C5通常配对。高倍性细胞占总细胞比例的1.7%左右，此外，染色体大多以单拷贝存在。

Vero细胞因其特有的遗传特性而在病毒学、疫苗开发和病原体检测等领域得到广泛应用，适用于检测verotoxin的存在以及支原体和疫苗的质量控制。Vero细胞还被用于其他病毒研究、药物筛选和食品病原体检测等。

vero细胞特性特征

• Vero细胞是一种非整倍性的连续细胞系，这意味着其染色体数目异常，能够通过多次分裂周期而不衰老。

• Vero细胞在培养时表现出良好的贴壁生长能力，细胞膜界线清晰，胞浆透明度高。通常在传代后的第三天开始形成单层，第七天形成致密单层，并在第十二天后逐渐老化。
  

• Vero细胞在病毒感染时不会分泌干扰素α/β，但仍具有干扰素受体（IFNAR），能够对外源性干扰素作出反应。这一特性使其在病毒研究中具有重要价值。
  

• 2014年研究显示Vero细胞的整个基因组序列，揭示其为连续的非整倍性细胞系，具有染色体数目异常的特征。这些特征使得Vero细胞在生产疫苗和生物制药方面具有优势。
  

• Vero细胞能有效表达多种蛋白质，并且作为转染宿主时表现出良好的转染效率。这使得其在基因工程和疫苗开发中得到广泛应用。
  

• Vero细胞广泛应用于病毒感染机制研究、疫苗生产（如狂犬病疫苗、流感疫苗等）、毒素检测（如大肠杆菌毒素）以及生物制药（如干扰素、粒细胞生长因子等）的生产
  

vero细胞参数表

Vero细胞在新冠疫苗研发中的应用

• 对新冠病毒的研究：
  

• Vero-E6细胞被认为对严重急性呼吸综合征冠状病毒-2（SARS-CoV-2）高度敏感，适合用于研究COVID-19的发病机制和疫苗开发。研究人员利用CRISPR/Cas9技术对Vero细胞进行基因编辑，以识别与SARS-CoV-2感染相关的重要宿主因子。

• 基因编辑技术的应用：

• CRISPR/Cas9技术已被应用于Vero细胞，以增强对新冠病毒的研究。例如，通过基因敲除或敲入来探索与病毒感染相关的基因，这有助于理解COVID-19的发病机制并开发新的治疗策略和疫苗。

• WHO的认可：

• Vero细胞已被世界卫生组织（WHO）批准作为疫苗生产的标准细胞系，尤其是在流感和其他病毒性疫苗的生产中。其广泛应用确保了疫苗生产过程中的安全性和有效性。

vero细胞（非洲绿猴肾细胞）培养教程

vero细胞复苏步骤

• 解冻Vero细胞：将冻存的Vero细胞管放入37°C水浴中快速解冻，轻微摇晃以加快解冻速度。解冻后，将4 mL预热的完全培养基加入Vero细胞悬液中，轻轻混匀。

• 离心清洗：将Vero细胞以1000 rpm离心4分钟，弃去上清液，加入1-2 mL培养基轻轻重悬。

• 初步培养：将Vero细胞悬液转移至含适量培养基的培养瓶中（如T25瓶），置于37°C培养箱中过夜。次日更换培养基，并观察Vero细胞的贴壁情况。

vero细胞传代步骤

• 准备：弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤Vero细胞1-2次，去除残留的血清。

• 酶消化：加入0.25%胰蛋白酶和0.02% EDTA的混合消化液，确保覆盖所有Vero细胞。将培养瓶置于37°C培养箱中消化1-3分钟，观察细胞形态。待大部分Vero细胞变圆并脱落后，迅速取出。

• 终止消化：加入2-3 mL完全培养基终止消化，轻轻混匀，将Vero细胞转移至无菌离心管中。

• 离心：以1000 rpm离心5分钟，弃去上清，再加入1-2 mL培养基重悬Vero细胞。

• 分瓶：按1:2的比例将Vero细胞悬液分配至新的培养瓶中，补加8 mL培养基，放回培养箱中继续培养。

vero细胞冻存步骤

• 收集Vero细胞：选择生长状态良好的Vero细胞，将其转入无菌离心管中，以1000 rpm离心4分钟，弃去上清，并用PBS清洗。

• 计数与冻存液准备：根据Vero细胞数量加入无血清冻存液，使细胞密度达到5×10^6至1×10^7/mL，轻轻混匀。每支冻存管中加入1 mL Vero细胞悬液并标记清晰。

• 冷冻保存：将冻存管先置于-80°C冷冻24小时，然后转入液氮中长期保存，以确保Vero细胞的活性和储存效果。

注意事项

• 无菌操作：在Vero细胞操作过程中，需确保环境的无菌性。使用75%酒精擦拭台面和器具，减少污染风险。

• 培养基新鲜性：每次培养和传代时，建议使用新配制的完全培养基，避免使用运输或长时间存放的培养基。

• 传代比例：Vero细胞初次传代时，建议按1:2的比例，避免在单一的T25瓶中培养过多细胞，以防因密度过高影响Vero细胞的状态。

• 生长状态检查：定期观察Vero细胞的生长状态，若出现生长缓慢、形态异常等情况，应及时调整培养条件或更换培养基。